酵母基因組DNA大量提取試劑盒是高品質的DNA提取純化產品，由北京百奧萊博供應，本產品用于科學研究，我公司的酵母基因組DNA大量提取試劑盒品質上佳，經過多年的開發生產，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...

特別提示：包括酵母基因組DNA大量提取試劑盒在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：酵母基因組DNA大量提取試劑盒
英文名稱：Yeast DNA Massive Extraction Kit
產品貨號：ALH156
產品規格：10次

本試劑盒用于快速的從酵母中大量提取基因組DNA。在針對酵母細胞特點配制的酵母裂解液作用下， 酵母細胞被裂解釋放出基因組DNA，然后蛋白沉淀液選擇性沉淀去除蛋白，zuì后純凈的基因組DNA通過異丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。

試劑盒組份：
酵母裂解液——————100ml×2
蛋白沉淀液——————70ml
DNA溶解液 ——————30ml

產品特點：
1.不需要使用有毒的苯酚、氯fǎng等試劑。
2.快速，簡捷，整個過程可在1個小時內完成。
3.結果穩定，產量高（比離心柱型的產量高一倍以上），OD260/OD280典型的比值達1.7～1.9，長度可達50Kb-150kb，可直接用于PCR，Southern-blot和各種酶切反應以及文庫構建。

操作步驟：
1. 吸取60ml-70ml 酵母培養物到一個100ml 離心管；2,500 x g 離心2 分鐘，盡可能棄上清，必要時候可以用槍吸去。
2. 高速渦旋振蕩，打散重懸酵母細胞團。
3. 加入20 ml 酵母裂解液，渦旋振蕩混勻，或者用1 毫升的槍頭反復吹打混勻。酵母細胞的重懸分散對下一步裂解非常重要，必須充分分散重懸。
4. 將裂解物放置在70℃水浴15-30 分鐘。
如果產量低，可以適當提高水浴溫度和延長水浴時間，中間可以渦旋振蕩混勻幾次幫助裂解。
5. 冰上至少5 分鐘使回復到室溫。
6. 在回復到室溫的裂解物內加入6.8 ml 蛋白沉淀液后，在渦旋振蕩器上高速連續振蕩混勻25 秒?；靹蚝罂赡芤姷揭恍┬〉牡鞍讏F塊。冰浴5 分鐘。
7. 2,500 x g(可根據需要調整加大離心力)離心5 分鐘。這時應該可以見到管底蛋白沉淀，也可能見到一些蛋白沉淀漂浮在液體表面。
8. 小心緩慢吸取上清到一個新的100ml 離心管中，不要吸到沉淀。吸取上清時，注意不要吸到管底的和漂浮在液體表面的蛋白沉淀。如果不小心將蛋白沉淀轉入新的離心管中，可再次離心2 分鐘后取上清。
9. 加入等體積的室溫異丙醇，顛倒30 次混勻或者直到出現絮狀DNA 沉淀（或者白色渾濁沉淀）。
10. 2,500 x g 離心5 分鐘(可根據需要調整加大離心力)，在管底可以見到白色的DNA沉淀塊，倒棄上清。
11. 加入20ml 70％乙醇，顛倒幾次漂洗DNA 沉淀，2,500 x g 離心2 分鐘， 倒去上清（注意不要把DNA 沉淀倒掉了），倒置后在吸水紙上輕敲幾下以控干殘留乙醇，還可以用槍頭小心吸掉管底沉淀周圍和管壁的殘留乙醇，空氣晾干沉淀幾分鐘。注意不要干燥過頭，否則DNA其難溶；也不能殘留太多乙醇，否則乙醇可能抑制下游如酶切反應。
12. 加入1-3ml DNA 溶解液重新水化溶解DNA 沉淀，輕彈管壁混勻，可以放置在65℃溫育30-60 分鐘（不要超過一小時），也可以在室溫或者4℃放置過夜來重新水化DNA。期間不時的輕彈管壁幫助重新水化DNA。
13. 加入0.5-1ml RNase A（10mg/ml），顛倒混勻，37℃溫育30－60 分鐘去除殘留RNA。該步驟主要作用為去除殘留的RNA，如果殘留RNA多，可以適當延長時間或者增加RNase A 用量。如果殘留RNA 不影響實驗，可略去該步驟。如果殘留的RNA酶可能影響實驗，也可以用等體積酚/氯fǎng抽提去除，然后用標準的乙醇沉淀回收DNA。
14. DNA 可以存放在2-8℃，如果要長時間存放，可以放置在－20℃。

儲存條件：室溫，有效期12個月。

本制品別名：酵母DNA大量提取試劑盒|大齡酵母DNA提取試劑盒

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名稱：無內毒素質粒DNA大量提取試劑盒
貨號：BTN81107
規格：5次
本試劑盒是整合大提質粒DNA提取試劑盒和菌體內毒素清除劑兩產品而成。菌體內毒素清除劑是我司推出的產品，在質粒提取前就把細胞壁上的內毒素清除掉，徹底避免了目前通用的先提取DNA+內毒素混合物，再從中純化質粒DNA的弊端。用本產品提取的質粒DNA，內毒素的污染濃度低，適合于轉染等對內毒素的污染敏感的實驗。

試劑盒特點：
1. 操作簡單，只在經典的柱式質粒DNA提取前，增加菌體內毒素清除一步。
2. 去內毒素效果好，處理一次可以去除99%以上的內毒素。
3.質粒丟失少，產率只比柱式質粒DNA提取試劑盒低5-10%，效果好于先提質粒DNA，再用液相內毒素清除劑處理的方法。
4. DNA可以直接用于轉染等實驗。

試劑盒組成：

成分	規格
菌體內毒素清除劑	200ml
溶液A	25ml
溶液B	25ml
溶液C	35ml
RNase A溶液(10mg/mL)	300μl
吸附柱活化液	12.5ml
大提離心吸附柱	5套
通用洗柱液	100ml
DNA洗脫液3.0	10ml
說明書	1份

儲存條件：RNase A溶液需4℃或-20℃保存，其余成分可室溫保存，如有沉淀可加熱溶解后再使用。

使用方法：
1. 用50mL塑料離心管收集不超過40mL的E.coli 飽和菌液，5000rpm離心5-10分鐘，棄上清，得到細菌沉淀。
2. 加入10mL菌體內毒素清除劑，溫和混勻后5000rpm離心5-10分鐘，棄上清(含內毒素)。
3. 重復上述操作3次，得到的菌體將丟失了大部分細胞表面的內毒素。
4. 往細菌沉淀中加入5mL溶液A(次使用時需要將RNase A溶液全部加入并混合均勻，未用完的部分放4℃保存)，充分振蕩懸浮。注意：充分重懸細胞沉淀(無塊狀物)對于獲得高的質粒產量十分重要。
5. 加5mL溶液B，溫和翻轉10 余次至透明。若混合液不透明，應減少細菌的用量或室溫放臵5-10分鐘直到裂解液變透明。注意: 避免劇烈振蕩，否則細菌基因組DNA 將斷裂為小片段，與質粒難以分離，污染質粒DNA。
6. 加入冰浴的7mL溶液C，顛倒混勻，冰上放臵10分鐘?；旌衔镏袑⒂邪咨鯛钗镄纬?。注意不要過分振蕩。
7.在等待期間，活化離心吸附柱。在離心吸附柱中加入2.5mL活化液，套上收集管后室溫放臵2分鐘，然后5000rpm離心2分鐘，倒棄穿透液，再將吸附柱套上收集管后待用?；罨蟮碾x心吸附柱必須立即使用。如果不活化，質粒得率將低20-40%左右。
8. 6000rpm離心10分鐘。如果離心管承受能力強，離心速度還可以適當提高以充分沉淀絮狀物。
9. 將上步得到的上清液移入到大提離心吸附柱中，放入50mL收集管中。室溫放臵5分鐘左右以便讓質粒DNA跟膜結合。
10. 6000rpm離心5分鐘，質粒DNA 將與大提離心吸附柱中的膜結合。棄穿透液。
11. 將10mL通用洗柱液加入到離心吸附柱中，室溫靜臵2分鐘后6000rpm離心5分鐘，棄穿透液。
12. 重復上步一次。
13.室溫6000rpm 空甩5分鐘，棄穿透液。注意：此步很重要，不能跳過，否則殘留乙醇會影響后續實驗。
14. 將大提離心吸附柱放入一個干凈的50mL塑料離心管中，加0.5mL DNA洗脫液3.0(洗脫液如加熱到50-65℃效果更佳)，室溫靜臵2分鐘后6000rpm離心5分鐘，收集液即是質粒DNA溶液。
15. 重復上步3-4次可洗脫更多的質粒DNA。DNA 洗脫液3.0 不夠可以用TE或超純水替代。
16. 合并所得質粒DNA，立即使用或-20℃儲存。

注意事項：
1．細菌培養時間一般為12-16小時，但接種量大時應減少時間。過度培養會降低質粒的質量甚至導致質粒DNA突變。
2．注意溶液A：溶液B：溶液C的比例為5：5：7。若細菌量增大，需按比例放大這些溶液的使用量。
3．隨菌體增多應延長溶液B的作用時間，直至溶液成粘稠透明狀。但時間過長會導致質粒DNA變性。
4．加溶液C后形成的白色沉淀中有變性的蛋白質、細菌基因組DNA和細胞碎片，離心后應避免帶入到后續處理中。
5．通用洗柱液洗滌離心柱后必須甩干一次，否則殘留通用洗柱液中的乙醇會干擾后續實驗。
6．質粒的具體產量跟細菌量、質粒拷貝數、質粒大小和操作規范程度密切相關。一般1.5mL 過夜培養菌體可收獲約10μg高拷貝質粒。
7．純化的質粒在電泳中表現為2-3 條帶有時甚至為4-6 條帶均屬正常，未分開的環套質粒，易被誤判為基因組DNA。

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