WH0032 無內毒素質粒中量提取試劑盒
- 產品/服務：WH0032 無內毒素質粒中量提取試劑盒
- 型 號：WH0032
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-04-19
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：1061
產品簡介
無內毒素質粒中量提取試劑盒由專業試劑供應商北京百奧萊博提供，用于科研試驗，我公司專注于DNA提取純化產品的研發、生產和供應，為您提供的無內毒素質粒中量提取試劑盒質量可靠，批間差小，且價格公道，熱切盼望您選購我們的產品。...
產品詳細介紹
特別提示：包括無內毒素質粒中量提取試劑盒在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
產品名稱：無內毒素質粒中量提取試劑盒
英文名稱：Endotoxin-free Plasmid middle Extraction Kit
產品貨號：WH0032
產品規格：10次
本試劑盒采用獨特的硅膠膜吸附技術，專一地結合質粒DNA。同時采用特殊的溶液EBT和過濾器CS1，可有效的去除內毒素、蛋白等雜質；整個提取過程僅需1h，方便快捷。提取的質粒適用于酶切、測序、細胞轉化、細胞轉染、顯微注射等分子生物學及細胞生物學實驗。
產品特點：
·適用于從50-100ml菌液中提取質。
·所獲得質粒內毒素殘留低，滿足于高質量的轉染。
·采用獨特的快速內毒素去除方法，操作更為便捷。
提取實例：
用本試劑盒提取的pEGFP-C1質粒，使用我司轉染試劑（貨號WH2000)轉染接種12h后匯合度約為80%的293T細胞，轉染24h～36h后觀察GFP熒光，統計轉染率為80～90%。
質粒得率：
| 質粒類型 | 處理量 | 得率 |
| 高拷貝質粒 | 菌液50ml | 250μg～750μg |
| 低拷貝質粒 | 菌液100ml | 100μg～300μg |
試劑盒組成：
| 組分 | 10T |
| 平衡液BL | 30ml |
| 溶液P1 | 30ml |
| 溶液P2 | 30ml |
| 溶液E3 | 15ml |
| 溶液EBT | 70ml |
| 漂洗液GDE | 30ml |
| 漂洗液MRDE | 36ml |
| 漂洗液PWF | 16ml |
| 洗脫緩沖液TB | 15ml |
| RNase A（100mg/ml) | 150μl |
| 過濾器CS1 | 10個 |
| 吸附柱CP7 | 10個 |
| 收集管（15ml) | 20個 |
保存條件：室溫（15-25℃)干燥條件下，可保存12個月；更長時間的保存可置于2-8℃。2-8℃保存時，若溶液產生沉淀，應在使用前置于37℃溶解沉淀。次使用前將RNase A加入溶液P1中，混勻后置于2-8℃保存，可穩定保存6個月。單獨包裝的RNase A在室溫可穩定保存12個月。
注意事項：（請務必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項)
1．溶液P1在使用前先加入RNase A（將試劑盒中提供的RNase A全部加入），混勻，置于2-8℃保存。
2．次使用前應按照試劑瓶標簽的說明現在漂洗液PWF和MRDE中加入無水乙醇。
3．使用前先檢查平衡液BL、溶液P2、溶液E3和溶液EBT是否出現結晶或者沉淀，如有結晶或者沉淀現象，可在37℃水浴中加熱幾分鐘，即可恢復澄清。
4．注意皮膚不能直接接觸溶液P2、E3和EBT，使用后應立即蓋緊蓋子。
5．使用過濾器時請將推柄小心緩慢地從過濾管中抽出，避免濾膜因壓力而松動。
6．提取的質粒量與細菌培養濃度、質粒拷貝數等因素有關。如果所提質粒為低拷貝質粒或大于10 kb的大質粒，應加大菌體使用量，同時按比例增加P1、P2、E3、EBT的用量；洗脫緩沖液推薦在65-70℃水浴中預熱（可以適當延長吸附和洗脫時間，以提高提取效率）。
7．實驗前使用平衡液BL處理吸附柱，可以zuì大限度激活硅基質膜，提高得率。
8．用平衡液處理過的柱子zuì好立即使用，放置時間過長會影響使用效果。
使用方法：
使用前請先在漂洗液PWF和MRDE中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標簽。
1．柱平衡步驟：向吸附柱CP7中（吸附柱放入15 ml收集管中)加入2 ml的平衡液BL，5,000rpm（~4,500 xg)離心2min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。（用平衡液處理過的柱子zuì好立即使用)。
2．取20-50 ml （根據培養菌體的濃度選擇合適的量,低拷貝推薦用100ml)過夜培養的菌液加入離心管，室溫5000rpm（~4,500 xg)離心3 min收集細菌，盡量吸除上清。
注意：菌液較多時可以通過幾次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中,菌液量以能夠充分裂解為佳，菌液過多會導致裂解不充分從而降低質粒的提取效率。
3．盡量吸除上清，為確保上清液全部吸取，請用干凈的吸水紙吸去瓶壁上的水滴。
4．向留有菌體沉淀的離心管中加入2.5 ml溶液P1 （請先檢查是否已加入RNase A)，使用移液器或渦旋振蕩器徹底懸浮細菌細胞沉淀。
注意：請務必徹底懸浮細菌沉淀，如果有未徹底混勻的菌塊，會影響裂解效果，導致提取量和純度偏低。對于低拷貝質粒，加大菌體用量的同時按比例增加P1、P2、E3和EBT的用量。
5．向離心管中加入2.5 ml溶液P2，立即溫和地上下翻轉6-8次，室溫放置5 min。
注意：溫和地混勻，不要劇烈震蕩，以免污染基因組DNA。此時菌液應變得清亮粘稠，如果未變得清亮，可能由于菌體過多，裂解不徹底，應減少菌體量。
6．向離心管中加入1.25 ml溶液E3，立即溫和地上下翻轉6-8次，充分混勻，至溶液出現白色分散絮狀沉淀。然后室溫放置2-3 min左右。5000rpm（~4,500 xg)離心10 min，使白色沉淀離至管底（可適當增加離心時間)，將全部溶液小心倒入過濾器CS1中（請避免倒入大量沉淀而阻塞過濾器)，慢慢推動推柄過濾，濾液收集在干凈的15 ml的管中（自備)。
注意：加入溶液E3后應立即混勻，避免產生局部沉淀。如果離心后倒入過濾器CS1中的溶液有白色沉淀也不會影響過濾。如果菌體過多（>50 ml)，推薦延長離心時間至20-30min。
7．向濾液中加入等體積溶液EBT，立即上下翻轉7-10次，充分混勻。
8．轉移4 ml混合液至吸附柱CP7中（吸附柱放入15 ml收集管中)，室溫5000rpm（~4500×g)離心3 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CP7重新放回收集管中。重復該步驟直至所有的混合液通過吸附柱CP7。
9．向吸附柱CP7中加入2 ml漂洗液GDE，5000rpm（~4500×g)離心3 min，棄掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
10．向吸附柱CP7中加入3 ml漂洗液MRDE （請檢查是否已加入無水乙醇)，5000rpm（~4500×g)離心3 min，棄掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
11．向吸附柱CP7中加入3.5ml漂洗液PWF（請檢查是否已加入無水乙醇)，5000rpm（~4,500 xg)離心3 min，棄掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
12．重復操作步11。
13．5000rpm（~4,500 xg)離心10 min，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除。
注意：漂洗液中乙醇的殘留會影響后續的酶促反應（酶切、PCR等）實驗。為確保下游實驗不受殘留乙醇的影響，建議將吸附柱CP7開蓋，置于室溫放置數分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。
14．將吸附柱CP7置于一個干凈的15 ml收集管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加0.5-1 ml洗脫緩沖液TB，室溫放置2-3 min，然后室溫5000rpm（~4,500 xg)離心5 min。將15 ml離心管中的洗脫液全部移入一個干凈的1.5 ml離心管，-20℃保存。
注意：為了增加質粒的回收效率，可將得到的溶液重新加入到吸附柱中，重復步驟13。洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用ddH2O做洗脫液應保證其pH值在7.5-8.0范圍內，pH值低于7.0會降低洗脫效率。洗脫緩沖液用量的多少主要是依據質粒的拷貝數以及實驗所需要的濃度來確定。洗脫緩沖液體積不少于0.5 ml，體積過小影響回收效率。DNA產物應保存在-20℃，以防DNA降解。
質粒DNA濃度及純度檢測：
得到的質粒DNA可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。OD260值為1相當于大約50μg/ml雙鏈DNA。純化的質粒DNA OD260/OD280通常在1.7-1.9左右，可直接應用于細胞轉染甚至動物體內實驗等對DNA純度要求很高的實驗中。
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