抗凝血液基因組DNA提取試劑盒（的品牌是百奧萊博，是優質的DNA提取純化產品，本制品僅用于生物化學研究方面，本產品質量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多抗凝血液基因組DNA提取試劑盒（等DNA提取純化產品請聯系我司咨詢訂購。...

特別提示：包括抗凝血液基因組DNA提取試劑盒（0.1-20ml全血)在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：抗凝血液基因組DNA提取試劑盒（0.1-20ml全血)
英文名稱：Extraction kit for genomic DNA from Blood anticoagulated
產品貨號：WH0002
產品規格：50mL血|200mL血

本試劑盒采用獨特的緩沖液系統，提取0.1-20ml加入各種抗凝劑的新鮮血液和凍存血液樣品基因組DNA。本緩沖液系統可zuì大限度去除蛋白、色素、脂類及其他抑制性雜質污染。提取的基因組DNA片段大，產量高，純度好，穩定可靠。本試劑盒避免使用苯酚、氯fǎng等有機溶劑，回收的DNA可適用于各種常規操作，如酶切、PCR、文庫構建、Southern雜交等實驗。

試劑盒特點：
1．純凈：所得DNA沉淀為無色透明。在裂解過程中可將核酸與色素等雜質分離，全新漂洗液使雜質去除更徹底，更適合于高純度要求的下游實驗和長期保存。
2．快速：經過升級的CLA溶液處理配合獨特的FGA緩沖液，既可以更好的裂解紅細胞釋放DNA提高得率，又對基因組DNA損傷小，可以保護DNA的完整性。
3．應用廣泛：可處理0.1-20ml血液樣本，既可以獲得高得率的DNA，OD₂₆₀/230比值穩定在2.0以上，鹽離子及蛋白質等雜質殘留可以滿足芯片雜交，高通量測序等更多對DNA純度高的下游應用。

試劑盒組成：

組分	可處理50ml血液	可處理200ml血液
細胞裂解液CLA	125 ml	2×250 ml
緩沖液FGA	40 ml	160 ml
洗脫緩沖液TB	30 ml	60 ml
Proteinase K	250μl	1ml

保存條件：室溫（15-25℃）干燥條件下，可保存12個月，更長時間的保存可置于2-8℃。2-8℃保存條件下，若溶液產生沉淀，使用前應將試劑盒內的溶液在室溫放置一段時間，必要時可在37℃水浴中預熱10min，以溶解沉淀。

注意事項：（請務必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項)
1．血液樣品反復凍融，會導致提取的DNA片段較小、且提取量下降。所得基因組DNA也應盡可能避免反復凍融，以免斷裂。
2．血液樣品的儲存：
  a)短期保存：已加入抗凝劑的血液樣品可在2-8℃儲存zuì多10天，對于某些實驗例如Southern雜交等，需要得到完整全長的基因組DNA，請將血液樣品在2-8℃儲存不超過3天，此時基因組DNA的降解程度較輕。
  b)長期保存：已加入抗凝劑的血液請置于-70℃保存（如果提取的是高分子量的DNA，推薦使用EDTA作為抗凝劑）
3．所有離心操作均可在室溫下完成。

提取得率（根據血液樣品中白細胞數量的不同，DNA產量有所差異）

材料	保存時間	提取量	DNA產量	OD260/OD280
人類全血	4℃一周	300 μl	3-10μg	1.7～1.9
人類全血	4℃一周	1 ml	4-30 μg	1.7～1.9
人類全血	4℃一周	5 ml	100-200 μg	1.7～1.9
人類全血	4℃一周	10 ml	200-400 μg	1.7～1.9

使用方法：
一、小體積全血操作流程（<600μl血樣；以300μl血液處理量為例）
1．向300 μl抗凝劑的血液中加入750 μl細胞裂解液CLA，顛倒混勻20次。
  注意：為方便與離心機配套使用，可加入與血液等體積的細胞裂解液CLA,重復裂解兩次。
2．12000rpm （~13400×g)離心1 min。倒棄上清，將離心管倒置在干凈的吸水紙上停留2 min，確保沉淀在管中（此步驟應小心操作，為避免沉淀被倒出，推薦使用尖底離心管）。
  注意：在少的情況下沉淀可能會很松弛，所以要緩慢倒上清，將離心管倒置在吸水紙上是為了減少管壁上清的回流。
3．按照表1配制緩沖液FGA與Proteinase K的混合液。
  注意：此混合液zuì好現用現配，并在配好后1h之內用完。
4．加入200 μl緩沖液FGA與Proteinase K的混合液，立即上下劇烈震蕩或渦旋混勻至溶液無團塊。
  注意：當處理多個樣品時，加入緩沖液FGA和Proteinase K的混合液后要立即上下劇烈震蕩或渦旋混勻，不要等所有的樣品加完后再混勻。有可能出現痕量的膠狀沉淀難以混勻，此時可再次補加緩沖液FGA和Proteinase K的混合液（具體補加量見表1），再次渦旋混勻。
5．65℃水浴10min，其間顛倒混勻數次。
6．加入200 μl異丙醇，上下顛倒混勻50次至出現絲狀或簇狀基因組DNA。
注意：與異丙醇完全混合對于沉淀DNA非常重要，應該仔細觀察。
7．12000rpm（~13400×g)離心5 min，倒棄上清。將離心管倒置在干凈的吸水紙上，確保沉淀在管中。
  注意：在少的情況下沉淀可能會很松弛，所以要緩慢倒上清。如果樣品的白細胞數量足夠多，可以看到白色的DNA沉淀。
8．加入300 μl 70%乙醇，渦旋振蕩5 sec，12000rpm（~13400×g)離心2 min，倒棄上清。
9．將離心管倒置在干凈的吸水紙上停留至少5 min，確保沉淀在管中。
  注意：在少的情況下沉淀可能會很松弛，所以要緩慢倒上清，將離心管倒置在吸水紙上是為了減少管壁中上清的回流。
10．空氣干燥DNA沉淀直至所有的液體揮發干凈（至少5 min）。
  注意：乙醇的殘留會影響后續的酶反應（酶切、PCR等）實驗。但是要避免過分干燥DNA沉淀，因為過于干燥的DNA很難溶解。
11．加入200 μl緩沖液TB，低速渦旋5 sec，65℃加熱20 min溶解DNA，其間輕彈數次助溶。
  注意：如有難溶性物質存在，可將65℃孵育時間延長至1h。
二、中量全血操作流程（1-10 ml血樣；以5 ml血液處理量為例）
1．向5 ml含抗凝劑的血液中加入5 ml細胞裂解液CLA，顛倒混勻20次，3,600rpm（~2,000×g)離心2 min，倒棄上清。
2．再向其中加入7.5 ml細胞裂解液CLA，顛倒混勻20次，3,600rpm （~2,000×g)離心2min。倒棄上清，將離心管倒置在干凈的吸水紙上停留2 min，確保沉淀在管中（此步驟應小心操作，為避免沉淀被倒出，推薦使用尖底離心管）。
  注意：在少的情況下沉淀可能會很松弛，所以要緩慢倒上清，將離心管倒置在吸水紙上是為了減少管壁上清的回流。
3．按照表1配制緩沖液FGA與Proteinase K的混合液。
  注意：此混合液zuì好現用現配，并在配好后1小時之內用完。
4．加入3.3 ml緩沖液FGA與Proteinase K的混合液，立即上下劇烈震蕩或渦旋混勻至溶液無團塊。
  注意：當處理多個樣品時，加入緩沖液FGA和Proteinase K的混合液后要立即上下劇烈震蕩或渦旋混勻，不要等所有的樣品加完后再混勻。有可能出現痕量的膠狀沉淀難以混勻，此時可再次補加緩沖液FGA和Proteinase K的混合液（具體補加量見表1)，再次渦旋混勻。
5．65℃水浴10-30 min，其間顛倒混勻數次。
6．加入3.3 ml異丙醇，上下顛倒充分50次至出現絲狀或簇狀基因組DNA。
  注意：與異丙醇完全混合對于沉淀DNA非常重要，應該仔細觀察。
7．3,600rpm（~2,000×g )離心8 min，倒棄上清。將離心管倒置在干凈的吸水紙上，確保沉淀在管中。
  注意：在少的情況下沉淀可能會很松弛，所以要緩慢倒上清。如果樣品的白細胞數量足夠多，可以看到白色的DNA沉淀。
8．加入5 ml 70%乙醇，渦旋振蕩5 sec，3,600rpm（~2,000×g )離心3 min，倒棄上清。
9．將離心管倒置在干凈的吸水紙上停留至少5 min，確保沉淀在管中。
  注意：在少的情況下沉淀可能會很松弛，所以要緩慢倒上清，將離心管倒置在吸水紙上是為了減少管壁中上清的回流。
10．空氣干燥DNA沉淀直至所有的液體揮發干凈（至少5 min）。
  注意：乙醇的殘留會影響后續的酶反應（酶切、PCR等）實驗。但是要避免過分干燥DNA沉淀，因為過于干燥的DNA很難溶解。
11．加入500 μl緩沖液TB，低速渦旋5 sec，65℃加熱30 min溶解DNA，其間輕彈數次助溶。
  注意：如果使用少量的緩沖液TB溶解DNA，孵育時間可能需要延長。
三、大量全血操作流程（10-20ml血樣；以10 ml血液處理量為例）
1．處理樣品：
a．離心富集有核細胞進行核酸提取：將血樣3,600rpm（~2,000×g )離心15-20 min，抽棄血漿，取中間白膜層細胞加入到15 ml離心管中，加入10 ml細胞裂解液CLA，渦旋混勻10 sec，3,600rpm（~2,000×g )離心2 min，倒棄上清。再加入15 ml細胞裂解液CLA，渦旋混勻10 sec，3,600rpm（~2,000×g )離心2 min，倒棄上清。
b．細胞裂解液CLA處理血液標本分次富集有核細胞進行核酸提取：在15 ml離心管中添加細胞裂解液CLA和血液樣本（比例2.5:1），多次富集進行下游實驗。
  （例10 ml全血處理方式：在兩個15 ml離心管中分別加入5 ml的全血和10 ml細胞裂解液CLA，顛倒混勻5次，3,600rpm （~2,000×g )離心3 min，倒棄上清；再向其中加入2.5ml細胞裂解液CLA，渦旋混勻10 sec，混合到一支離心管里，3,600rpm（~2,000×g )離心3 min，倒棄上清；進行下游操作。）
  注意：細胞裂解液CLA處理步驟應小心操作，為避免沉淀被倒出，推薦使用尖底離心管。在少的情況下細胞裂解液CLA處理得到的沉淀可能會很松弛，所以要緩慢倒上清。
2．按照表1配置緩沖液FGA與Proteinase K的混合液，對于10-20ml的全血標本，每個樣品需要6.7 ml緩沖液FGA與Proteinase K工作液。
  注意：此混合液zuì好現用現配，并在配好后1h之內用完。
3．加入6.7 ml緩沖液FGA與Proteinase K的混合液，立即上下劇烈震蕩或渦旋混勻至溶液無團塊。
  注意：當處理多個樣品時，加入緩沖液FGA和Proteinase K的混合液后要立即上下劇烈震蕩或渦旋混勻，不要等所有的樣品加完后再混勻。有可能出現痕量的膠狀沉淀難以混勻，此時可再次補加1 ml緩沖液FGA和Proteinase K的混合液，再次渦旋混勻。
4．65℃水浴30 min，其間顛倒混勻數次。
  注意：隨著蛋白的消解，溶液的顏色從紅色變為黃綠色。
5．加入6.7 ml異丙醇，上下顛倒混勻50次至出現絲狀或簇狀基因組DNA。
  注意：與異丙醇完全混合對于沉淀DNA非常重要，應該仔細觀察。
6．離心3,600rpm（~2,000×g )離心10min，倒棄上清。將離心管倒置在干凈的吸水紙上，確保沉淀在管中。
  注意：如果得到的團塊過于松弛，可以延長離心時間或者增大離心力。
7．加入10 ml 70%乙醇，渦旋振蕩5 sec，離心3,600rpm（~2,000×g )離心3 min，倒棄上清。
  注意：如果得到的團塊過于松弛，可以延長離心時間或者增大離心力。
8．將離心管倒置在干凈的吸水紙上停留至少5 min，確保沉淀在管中。
  注意：在少的情況下沉淀可能會很松弛，所以要緩慢倒上清，將離心管倒置在吸水紙上是為了減少管壁中上清的回流。
9．空氣干燥DNA沉淀直至所有的液體揮發干凈（至少5 min）。
  注意：乙醇的殘留會影響后續的酶反應（酶切、PCR等）實驗。但是要避免過分干燥DNA沉淀，因為過于干燥的DNA很難溶解。
10．加入1 ml緩沖液TB，低速渦旋5 sec，65℃加熱1h溶解DNA，其間輕彈數次助溶。
  注意：如果使用少量的緩沖液TB溶解DNA，孵育時間需要延長。

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貨號	名稱	規格
BTN3660	非凍型組織DNA保存液	250mL
BTN70502	石蠟包埋組織DNA提取試劑盒	30次
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名稱：紅細胞裂解液A型(核酸純化)
貨號：BTN60403
規格：250mL
本品用于快速裂解哺乳動物全血中的紅細胞而基本不破壞白細胞和其他淋巴細胞的完整性。由于紅細胞是血液的主要細胞成份，不含DNA和RNA，其所含血紅素能抑制PCR反應，所以先用本產品裂解紅細胞，再提取基因組DNA或RNA 有助于提高所得樣品純度。

產品特點：
1.快速，一次處理只需要2-3分鐘。處理后提取血液DNA可以不需要酚/氯fǎng去蛋白質。
2.，一次處理能裂解80%以上的哺乳動物紅細胞，一般樣品zuì多只需要處理兩次。
3.擴容性好，可以一次處理多達幾十毫升的樣品，也可以處理100μL的血液。
4. 兼容性好，可以與市場上大多數血液DNA提取試劑盒結合使用。

儲存條件：常溫運輸，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在裝有抗凝血液的離心管中，按1:1的比例加入紅細胞裂解液A型并輕柔顛倒混勻。
2. 5000-10000 g室溫離心2分鐘，小心吸棄棄上清。
3. 將細胞沉淀重懸于1/2 體積的紅細胞裂解液A型中，輕柔吹打混勻后5000-10000g室溫離心2分鐘。
4.沉淀即為去除了紅細胞的血液細胞，可以直接用于后續的實驗。

名稱：柱式土壤DNA提取試劑盒
貨號：BTN71205
規格：50次
本試劑盒專門用于從各種土壤樣品和河海沉積物中提取高質量的DNA的試劑。

試劑盒特點：
1. 去污染效果更好，得到的DNA可以直接作為PCR模板或酶切，不需要再進行去腐殖酸處理。
2. 操作過程更加簡單快速，整個操作只需要10多分鐘，擴容性好。
3.產量高，每克土壤一般可以提取到5-50μg DNA，片段長度在20-50 Kb，OD260/280一般都在1.8以上。
4.適合于各種土壤(包括河海沉積物)。

試劑盒組成：

成分	規格
溶液A	25ml
溶液B	25ml
溶液C	40ml
離心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脫液2.0	10ml
說明書	1份

儲存條件：常溫運輸及保存，保存期為一年。

使用方法：
1. 65℃預熱溶液A，待其沉淀溶化后充分混勻，取0.5mL加入到1.5mL塑料離心管中并放置于65℃待用。
2. 稱取0.1-0.3 g的土壤，加入到含預熱溶液A的離心管中，震蕩器上劇烈震蕩5-10分鐘。如果是擴量操作，可以使用更多土壤和較大離心管。也可以將同一種土壤在較大離心管中震蕩處理，然后再分到1.5mL離心管中。注意:不論使用大的還是小的離心管，一定要讓管底的土壤震蕩起來。
3. 將離心管置于65℃水浴中保溫至少5分鐘。
4. 12000～15000g室溫離心3分鐘，將上清轉移到一新離心管中(上清液一般呈淡黃色或深棕色，實際顏色取決于腐殖酸的含量，上清液的體積一般為300-400μl)。
5.在上清液中加入等體積的溶液B，上下顛倒30秒充分混勻，溶液將呈白色或淡黃色混濁狀。
6. 將離心管冰浴至少5分鐘。
7. 12000～15000g室溫離心3分鐘，轉移上清到新的1.5mL離心管中，上清液顏色將比第4步得到的上清的顏色稍淡，體積在0.7mL左右。
 注意：下面第8-第9步的氯fǎng抽提操作可以省略，直接進入第10步，但DNA的產量會低50%左右，OD260/280在1.7-1.8。如果直接進入第10步，則轉移的溶液體積不要超過0.6mL，否則沒有空間加溶液C。
8. 加入0.2mL的氯fǎng(自備)，震蕩器上充分振蕩30秒混勻。注意:一定要讓管底的溶液震蕩起來。
9. 12000～15000g室溫離心3分鐘，小心轉移上清到新離心管中。說明：離心后兩相交界面將有白色膜狀物，其中有機相部分顏色較深，一般呈淡棕色。上清的顏色取決于土壤中腐殖酸的含量。將上清轉移到新的1.5mL離心管時，不要超過0.6mL，否則沒有空間加溶液C。如果有多余的可以棄之不用。
10. 加入1.5倍體積的溶液C，上下顛倒30秒混勻。
11. 分兩次上柱(即先轉移一半的混合液到離心吸附柱中，12000～15000g室溫離心半分鐘，棄穿透液，然后再將剩下的混合液到離心吸附柱中，12000～15000g室溫離心半分鐘，棄穿透液)。
12. 加0.7mL通用洗柱液到離心吸附柱中，12000～15000g室溫離心半分鐘，棄穿透液。
13. 如果有必要，可以再加0.3mL通用洗柱液到離心吸附柱中，12000～15000g室溫離心半分鐘，棄穿透液。增加一步洗滌能使zuì后得到的DNA的純度稍有提高，但產量稍微有所降低。
14. 12000～15000g室溫再離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的通用洗柱液會污染DNA。
15. 將離心吸附柱轉移到一新的1.5mL塑料離心管中，加入50-100μL DNA洗脫液2.0。
16.室溫放置離心吸附柱1-2分鐘。
17. 12000～15000g室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為DNA樣品，可以立即使用或存放于冰箱待用。

疑難解答：
Q: 如何判斷提取的DNA沒有腐植酸污染？
A：方法一是目測法，即看得到的溶液是否無色。如果呈淡棕黑色或淡黃色，說明可能是少量殘留的未除盡的腐植酸。方法二是檢測zuì大光吸收。注意：有腐植酸污Q: 如何判斷提取的ＤＮＡ沒有腐植酸污染？
A：方法一是目測法，即看得到的溶液是否無色。如果呈淡棕黑色或淡黃色，說明可能是少量殘留的未除盡的腐植酸。方法二是檢測zuì大光吸收。注意：有腐植酸污染并不表示 DNA 不能使用，有的腐殖酸并不抑制 PCR擴增。
Q: 腐殖酸的zuì大吸收波長是多少？
A：腐植酸(humic acid)是一大類呈棕黑色或黑色的物質，其結構千差萬別，土壤中腐殖酸的組成和特點隨土壤不同而不同，所以其zuì大吸收波長也各不相同，有的土壤的腐殖酸在 260nm 有zuì大吸收(見 Appl.Environ. Microbiol.，63：4993，1997)，有的則在 340nm。所以用特定的波長測定 OD 值時波長的選定要根據土壤而決定。Sigma，Fluke等公司出售的腐植酸產品成分一般比較簡單，其zuì大吸收波長不能推廣到成分更為復雜的土壤腐殖酸樣品。
Q:是否腐植酸都會抑制后續的DNA反應？
A：否，因為腐植酸是一大類物質的統稱，他們的結構和特性各不相同，所以是否對后續反應有影響zuì好通過實驗來驗證。如果用提取的DNA溶液原液進行反應而反應沒發生，而對照樣品(已知的不含污染的DNA)能夠發生，說明可能抑制作用。
Q：如果得到的DNA樣品還是含有抑制后續反應的腐植酸，如何去除？
A：如果提取的DNA原液不能擴增，可以將樣品稀釋10倍和100倍再進行 PCR，抑制作用一般可以解除。如果仍然抑制，可以使用我公司的PCR Inhibitor Scavenger(BTN60804)。如果仍然不能解除，則可以通過柱式腐殖酸清除劑(BTN60801)或先電泳，再用片段膠回收試劑 Magic Gel DNArc(BTN60706)純化土壤 DNA，去除殘留抑制劑。其中后兩方法zuì有效，得到的原液一般可以直接擴增。
Q：在用土壤 DNA進行細菌專一性 PCR時，為何沒加 DNA 模版的陰性對照有擴增產物出現？
A：這是由于使用的Taq DNA聚合酶一般從E.coli表達菌株中提取，提取過程中污染了E.coli的基因組 DNA，而使用的廣譜細菌專一性引物可以識別所有細菌DNA基因組DNA模版，所以會產生擴增。建議使用高質量的Taq DNA聚合酶。

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