組織細胞DNA/RNA分離提取試是高品質(zhì)的DNA提取純化產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應(yīng)，本產(chǎn)品用于科研試驗，組織細胞DNA/RNA分離提取試是我司眾多優(yōu)質(zhì)DNA提取純化之一，質(zhì)量堪比同類進口產(chǎn)品，價格非常優(yōu)惠，目前正熱烈促銷中，恭候您的咨詢訂購。...

特別提示：包括組織細胞DNA/RNA分離提取試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：組織細胞DNA/RNA分離提取試劑盒
英文名稱：Tissue cell DNA/RNA Extraction Kit
產(chǎn)品貨號：ALH023
產(chǎn)品規(guī)格：50次

本試劑盒設(shè)計用于快速從同一個動物細胞或者組織樣品中同時提取分離基因組DNA和總RNA。獨特的裂解液迅速裂解細胞和滅活細胞RNA/DNA酶，然后裂解混合物DNA/RNA同時通過一個基因組DNA吸附柱，基因組DNA被吸附而RNA穿透濾過。DNA吸附柱上基因組DNA經(jīng)過一系列漂洗-離心后洗脫得到純凈基因組DNA。濾過的RNA用乙醇調(diào)節(jié)結(jié)合條件后，RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于RNA吸附柱上， 再通過一系列快速的漂洗-離心洗脫得到純凈的RNA。無苯酚、氯fǎngDNA/RNA快速提取技術(shù)基礎(chǔ)上配合獨特的分離技術(shù)同時得到的RNA/基因組DNA純度高，互不干擾。得到的RNA不需要DNase消化，可直接用于反轉(zhuǎn)錄PCR、熒光定量PCR等實驗。基因組DNA也可以直接用于下游的Southern、酶切、PCR等各種試驗。

試劑盒特點：
1.完全不使用有毒的苯酚，氯fǎng等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟。
2.快速，簡捷，單個樣品RNA/基因組DNA分離提取操作一般可在40分鐘內(nèi)完成。
3.試劑盒的獨特吸附柱和配方確保有效清除基因組DNA殘留，一般情況下得到的RNA不需要DNase消化，可直接用于反轉(zhuǎn)錄PCR、熒光定量PCR等實驗。
4. 多次柱漂洗確保RNA/基因組DNA高純度，可直接用于下游各種實驗。

試劑盒組份(50次)：
裂解液RLT Plus———————————50ml
去蛋白液RW1—————————————40ml
漂洗液RW——————————————10ml
RNase-free H2O———————————10ml
70%乙醇———————————————9ml RNase-free H2O(次使用前按說明加量乙醇)
抑制物去除液IR———————————25ml
漂洗液WB——————————————15ml
洗脫緩沖液EB————————————10ml
基因組DNA吸附柱和收集管———————50套
RNA吸附柱和收集管——————————50套

注意事項：
1. 所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達到13000rpm的傳統(tǒng)臺式離心機，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機。
2. 樣品處理量不要超過基因組吸附柱和和RNA吸附柱處理能力，否則造成DNA殘留或者產(chǎn)量降低。不同組織細胞種類RNA/DNA相差大，例如胸腺脾臟DNA含量豐富，超過5mg就會超過柱子處理能力。COS細胞RNA含量豐富，超過3×10^6細胞就會超過柱子吸附能力。所以開始摸索實驗條件時，如果不清楚樣品DNA/RNA含量時寧可使用較少的樣品處理量，如細胞不超過3～4×10^6，組織不超過10mg。將來根據(jù)樣品試驗情況增加或者減少處理量。
3. 裂解液RLT Plus、抑制物去除液IR、去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。
4. 預防RNase污染，應(yīng)注意以下幾方面：
1) 經(jīng)常更換新手套。因為皮膚經(jīng)常帶有細菌，可能導致RNase 污染。
2) 使用無RNase 的塑料制品和槍頭避免交叉污染。
3) RNA在裂解液RLT Plus中時不會被RNase降解。但提取后繼續(xù)處理過程中應(yīng)使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4小時，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10分鐘，然后用水徹底清洗，再滅菌，即可去除RNase。
4) 配制溶液應(yīng)使用無RNase的水。（將水加入到干凈的玻璃瓶中，加入DEPC至終濃度0.1%( v/v)，37℃放置過夜，高壓滅菌。）
5. 關(guān)于DNA的微量殘留：
一般說來任何總RNA提取試劑在提取過程中無法完全避免DNA的微量殘留（DNase 消化也無法做到無殘留），本公司的組織/細胞RNA/DNA分提試劑盒，由于采取了本公司獨特的緩沖體系和基因組DNA分離清除技術(shù)，大多數(shù)DNA已經(jīng)被清除，不需要DNase 消化，可直接用于反轉(zhuǎn)錄PCR 和熒光定量PCR。個別特殊情況如DNA含量過于豐富造成殘留或者要進行嚴格的mRNA表達量分析熒光定量PCR，我們建議在進行模板和引物的選擇時：
1) 選用跨內(nèi)含子的引物,以穿過mRNA中的連接區(qū),這樣DNA就不能作為模板參與擴增反應(yīng)。
2) 選擇基因組DNA和cDNA上擴增的產(chǎn)物大小不一樣的引物對。
3) 將RNA提取物用RNase-free 的DNase I 處理以提果。本試劑盒還可以用于DNase I 處理后的RNA清潔(cleanup),請聯(lián)系我們索取具體操作說明書。
4) 在步驟去蛋白液RW1 漂洗前，直接在吸附柱 上進行DNase I 處理。請聯(lián)系我們索取具體操作說明書。
6. RNA純度及濃度檢測：
完整性： RNA可用普通瓊脂糖凝膠電泳(電泳條件：膠濃度1.2%；0.5×TBE 電泳緩沖液；150v，15分鐘)檢測完整性。由于細胞中70%-80%的RNA為rRNA，電泳后UV 下應(yīng)能看到非常明顯的rRNA條帶。動物rRNA大小分別約為5 kb 和2kb，分別相當于28S和18SrRNA。動物RNA樣品中zuì大rRNA亮度應(yīng)為次大rRNA亮度的1.5-2.0 倍，否則表示RNA樣品的降解。出現(xiàn)彌散片狀或條帶消失表明樣品嚴重降解。
純度：OD260/OD280 比值是衡量蛋白質(zhì)污染程度的參考指標。高質(zhì)量的RNA，OD260/OD280 讀數(shù)（10mMTris, pH7.5）在1.8-2.1 之間。OD260/OD280 讀數(shù)受測定所用溶液的pH 值影響。同一個RNA樣品，假定在10mM Tris，pH7.5 溶液中測出的OD260/OD280 讀數(shù)1.8-2.1 之間，在水溶液中所測讀數(shù)則可能在1.5-1.9之間，但這并不表示RNA不純。
濃度：取一定量的RNA提取物，用RNase-free水稀釋n倍，用RNase-free水將分光光度計調(diào)零，取稀釋液進行OD260, OD280 測定，按照以下公式進行RNA濃度的計算：終濃度（ng/μl）= (OD260)×(稀釋倍數(shù)n)×40。

儲存條件：室溫，有效期12個月。

本制品別名：組織DNA/RNA提取試劑盒|細胞DNA/RNA提取試劑盒

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名稱：非凍型血液DNA保存液
貨號：BTN60910
規(guī)格：250mL
本品是在室溫條件下長期保存用于DNA提取的血液樣品的保存液，它通過裂解細胞并抑制DNase的活性而達到長期保證DNA分子的完整性。

產(chǎn)品特點：
1. 保存時間長，可常溫保存血液DNA 長達六個月，尤其適合于野外血液樣品采集。
2. DNA 完整性好，純化后長度在20-50 Kb之間。
3. DNA 無化學修飾，提得的DNA可用于酶切、電泳、Southern雜交和PCR等分子生物學實驗。
4.適用于各種動物血液(包括禽類血液)。
5. 安全可靠，本產(chǎn)品無害。
6. 使用簡單，直接把新鮮的血液樣品與本產(chǎn)品混合即可。

儲存條件：室溫運輸及保存，有效期兩年。

使用方法：

一: 哺乳動物血液(包括人血液)
1. 將抗凝血(1-10mL)加入到適當容量的塑料離心管中。
2. 加入等體積的血液DNAhold，充分振蕩混合均勻。
3. 常溫閉光保存直到使用。
4. 提取DNA時，可以取出部分液體，用自備的蛋白酶K(終濃度為0.1mg/mL)37℃處理過夜，然后再用經(jīng)典的酚/氯fǎng抽提+乙醇沉淀方法得到DNA。

二: 禽類血液
由于禽類血液有核細胞量遠高于哺乳動物，血液的使用量很少，一般只有哺乳動物血液用量的1/100 到1/1000，所以需先用等體積的水將血液DNAhold稀釋，然后直接將禽類血液加入。其余操作同上。

名稱：菌體內(nèi)毒素清除劑
貨號：BTN90901
規(guī)格：200mL
內(nèi)毒素是E.coli細胞壁的主要成分，傳統(tǒng)的去除內(nèi)毒素的方法是將內(nèi)毒素和DNA一起純化出來，然后再用各種方法去除其中的內(nèi)毒素，操作繁瑣，DNA 回收率低。本產(chǎn)品可以直接把E.coli 表面的內(nèi)毒素去除，從根本上避免了內(nèi)毒素對后續(xù)操作(如質(zhì)粒DNA提取，重組蛋白質(zhì)提取)的污染。

產(chǎn)品特點：
1. 個在菌體收集階段去除內(nèi)毒素的產(chǎn)品，從源頭上避免了內(nèi)毒素跟DNA和胞漿蛋白的接觸，從根本上防止了可能產(chǎn)生的污染。
2. 操作簡單快速，用酶溶液溫和清洗菌體3-4次即可去掉細菌表面的內(nèi)毒素，只需要10分鐘左右時間，不需要復雜儀器設(shè)備。
3.，能去除99%以上的內(nèi)毒素。
4.跟各種質(zhì)粒DNA提取、基因組DNA提取和蛋白質(zhì)提取等操作兼容，DNA丟失率只有10%左右(其他方法DNA 丟失率可以高達50%)。
5. 不影響DNA和大部分蛋白質(zhì)的活性，處理過的質(zhì)粒DNA可用于轉(zhuǎn)染實驗。
6. 既可小規(guī)模使用(在1.5mL離心管內(nèi))，也可放量用于大規(guī)模無內(nèi)毒素質(zhì)粒DNA提取和無內(nèi)毒素蛋白質(zhì)純化。

儲存條件：常溫運輸和保存，有效期一年。

使用方法：

一：用于菌液小于3mL的樣品
1. 收集1.5-3mL E.coli 飽和菌液，12000rpm離心1分鐘，棄上清，得到細菌沉淀。
2. 加入1mL 本產(chǎn)品溫和混勻后10,000-12000rpm離心1分鐘，棄上清(含內(nèi)毒素)。
3. 再重復上述操作3-4次，得到的菌體可以直接進入后續(xù)的無內(nèi)毒素質(zhì)粒DNA提取或無內(nèi)毒素蛋白質(zhì)提取程序。

二：用于菌液多于3mL的樣品
整個操作同上，只是在15或50mL塑料離心管中進行，離心速度不能超過離心管的承受力，本產(chǎn)品的用量按比例增加。

疑難解答：
Q:為何用常規(guī)的方法很難去除生物樣品中的內(nèi)毒素?
A:因為內(nèi)毒素帶電性跟DNA和部分蛋白質(zhì)相同，所以基于帶電性的分離方法(如硅膠膜吸附，離子交換吸附)不能將它們分開;同時內(nèi)毒素又是雙性分子(類似于細胞膜的磷脂分子)，能夠形成大小不等的聚合物，跟質(zhì)粒DNA和蛋白質(zhì)大小接近，所以基于分子量大小的分離方法(如凝膠排阻過濾和氯化銫超速離心)也不能將其有效分離。

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