BTN60807 柱式無內毒素質粒DNA提取試劑盒
- 產品/服務：BTN60807 柱式無內毒素質粒DNA提取試劑盒
- 型 號：BTN60807
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-04-17
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：872
產品簡介
柱式無內毒素質粒DNA提取試劑盒由專業試劑供應商北京百奧萊博提供，用于科學研究，我公司的柱式無內毒素質粒DNA提取試劑盒品質上佳，經過多年的開發生產，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...
產品詳細介紹
特別提示：包括柱式無內毒素質粒DNA提取試劑盒在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
產品名稱：柱式無內毒素質粒DNA提取試劑盒
英文名稱：Endotoxin-free plasmid DNA column extraction kit
產品貨號：BTN60807
產品規格：50次
本試劑盒是整合我們公司柱式質粒DNA提取和菌體內毒素清除劑兩產品而成。菌體內毒素清除劑是我們公司推出的產品，在質粒提取前就把細胞壁上的內毒素清除掉，徹底避免了目前通用的先提取DNA+內毒素混合物，再從中純化質粒DNA的弊端。用本產品提取的質粒DNA，內毒素的污染濃度低，適合于轉染等對內毒素的污染敏感的實驗。
試劑盒特點：
1. 操作簡單，只在經典的柱式質粒DNA提取前，增加菌體內毒素清除一步。
2. 去內毒素效果好，處理一次可以去除99%以上的內毒素。
3.質粒丟失少，產率只比柱式質粒DNA提取低5-10%，效果好于先提質粒DNA，再用液相內毒素清除劑處理的方法。
4. DNA可以直接用于轉染等實驗。
試劑盒組成：
| 成分 | 規格 |
| 菌體內毒素清除劑 | 200ml |
| 溶液A | 13ml |
| 溶液B | 13ml |
| RNase A(10mg/mL) | 150μl |
| 離心吸附柱 | 50套 |
| 通用洗柱液 | 50ml |
| DNA洗脫液2.0 | 10ml |
| 說明書 | 1份 |
儲存條件：常溫運輸及保存，有效期一年。RNase A(10mg/mL)需要低溫運輸和保存。
使用方法：
一: 用菌體內毒素清除劑清除E.coli細胞壁上的內毒素。
1. 收集1.5-3mL E.coli飽和菌液，12000rpm離心1分鐘，棄上清，得到細菌沉淀。
2. 加入1mL本產品溫和混勻后10,000-12000rpm離心1分鐘，棄上清(含內毒素)。
3. 再重復上述操作3-4次，得到的菌體可以直接進入后續的質粒DNA提取步驟。
二：從無內毒素的E.coli中提取質粒DNA
1. 用1.5mL離心管收集1-4mL 過夜培養飽和菌液，12000rpm離心1分鐘，棄上清，再短暫離心，吸棄殘留液體。
2. 加入250μl溶液A，用槍頭充分吹打使菌體重懸。
3. 加入250μl溶液B(如果有沉淀，用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用)，溫和反復顛倒混勻4-6次，看到溶液變粘即可。千萬不要劇烈振蕩。
4. 加入350μl溶液C，反復顛倒混勻4-6次，可見白色沉淀物產生，然后冰上靜止2-5分鐘。注意：不要超過5分鐘。
5.室溫12000rpm離心10分鐘，將上清液轉移到離心吸附柱中，室溫放置2分鐘。
6. 12000rpm離心1分鐘，質粒DNA吸附到膜上，棄收集管中的廢液。
7. 加入500μl的通用洗柱液，12000rpm離心1分鐘，棄收集管中的廢液。注意：我們公司的通用洗柱液是由乙醇和含NaCl的溶液組成，NaCl在其中的溶解度較低，放置一段時間后可能會產生NaCl沉淀。如果有沉淀，用前zuì好加熱使之溶解并混勻后使用。
8. 重復上步操作1次。
9. 12000rpm離心1分鐘，甩干殘留液體。此步不能省略，否則殘留乙醇會影響后續的電泳上樣(DNA沉不到加樣孔里去)和酶反應。
10. 將離心柱置于新的1.5mL離心管(自備)中，加入50μl DNA洗脫液2.0，室溫放置2分鐘。
11. 12000rpm離心1分鐘，離心管底溶液即質粒DNA。
12. 由于天我們公司的吸附柱結合DNA能力較強，需要再加入50μl DNA洗脫液2.0到離心吸附柱中，室溫放置2分鐘，重復上步操作，往往還能洗脫下很多質粒DNA(相當于次洗脫的20-30%)。注意不要使用上步得到的含有DNA的洗脫液來進行第二次洗脫。
13. 將兩次洗脫收集到的質粒DNA匯集即可立即使用或放冰箱保存。
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產品特點：
1.充分的酶法降解和快速的柱式提取相結合，前者使DNA充分釋放，后者使雜質充分被去除。
2.DNA回收率一般在0.5μg/100mg左右(理論產率一般是0.1-1.5μg之間)。
3.DNA純度高，OD比值一般在1.6-1.8之間。
4.提取的DNA能夠用于電泳、酶切、雜交檢測和PCR。
5.適合于動物的各種毛發。
試劑盒組成：
| 成分 | 規格 |
| 溶液A | 50mL |
| 蛋白酶K溶液(10mg/ml) | 1mL |
| 溶液B | 15mL |
| 溶液C | 50mL |
| 離心吸附柱(15層膜) | 50套 |
| 通用洗柱液 | 50mL |
| DNA洗脫液 | 5mL |
| 說明書 | 1份 |
儲存條件：常溫運輸及保存(蛋白酶K溶液需要-20℃保存)，有效期一年。
使用方法：
1.將30-50mg左右毛發充分剪碎(成芝麻大小就可以)，zuì后轉移到一個干凈的1.5mL塑料離心管中。注意：zuì好從靠近根部的地方剪取樣品。
2.加入1mL溶液A(使用之前需取本次實驗所需的溶液A現加入自備的β-巰基乙醇，β-巰基乙醇的終濃度為5%)和20μL蛋白酶K溶液(20mg/mL)，37℃保溫10小時(一般過夜保溫就可以)。
注意：zuì好讓反應體系處于搖晃狀態，此保溫長度一般可以讓毛發溶化。
3.加入0.3mL的溶液B和0.2mL的自備氯fǎng，振蕩器上振蕩30秒充分混勻。
4.12000rpm室溫離心3分鐘，小心將上清轉移到新的1.5mL塑料離心管中。
5.在上清液中加入等體積的溶液C，上下顛倒30秒充分混勻。
6.將混合液分兩次轉移到離心吸附柱中。每次是先將0.7-0.8mL混合液轉移到離心吸附柱中，室溫放置2分鐘，12000rpm室溫1分鐘，棄穿透液。再把剩余的一半上柱，重復此操作。
7.將0.7mL通用洗柱液加入到離心吸附柱中，12000rpm室溫離心半分鐘，棄穿透液。
8.將0.3mL通用洗柱液加入到離心吸附柱中，12000rpm離心半分鐘(此步為第二次洗滌，一般可以省略)。
9.空甩離心吸附柱半分鐘去除殘留液體。
10.將離心吸附柱放置在一新的1.5mL塑料離心管中，加入30μL通用洗脫液。
11.12000rpm離心1分鐘，管底即為毛發DNA溶液，可立即用于PCR，也可長期保存在－20℃。
注意：由于頭發中DNA的含量十分少，所以電泳檢測時即使全部上樣也只能看見十分微弱的DNA條帶。
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