WE0185 血塊基因組DNA提取試劑盒

產品簡介
血塊基因組DNA提取試劑盒的品牌是百奧萊博,是優質的DNA提取純化產品,本制品用于生化實驗研究等領域,血塊基因組DNA提取試劑盒是我司眾多優質DNA提取純化之一,質量堪比同類進口產品,價格非常優惠,目前正熱烈促銷中,恭候您的咨詢訂購。...
產品詳細介紹
特別提示:包括血塊基因組DNA提取試劑盒在內,本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途!
產品名稱:血塊基因組DNA提取試劑盒
英文名稱:BloodClot Blood DNA Extraction Kit
產品貨號:WE0185
產品規格:50次
本試劑盒供了一種快速、簡單、的從血片中提取基因組DNA的方法。既適用于未加抗凝劑的血液,也可用于加入EDTA、檸檬酸鹽、肝素等抗凝劑的血液樣本。樣品裂解后,DNA被選擇性的吸附到硅基質膜上。兩步漂洗后,高質量的DNA被溶解到洗脫液中。純化得到的DNA無酶抑制劑和其他雜質的殘留,A260/A280的比值在1.5-2.3。DNAzuì長可達50 kb,適用于PCR,Real-time PCR、Southern blotting等實驗。
試劑盒組成:
| 組份 | 50次 |
| Buffer GTL | 15ml |
| Buffer GC | 15ml |
| Buffer GW1(濃縮液) | 13ml |
| Buffer PW2(濃縮液) | 18ml |
| Buffer GE | 15ml |
| 蛋白酶K | 25mg |
| 蛋白酶K 儲存液 | 1.25ml |
| 吸附柱DC及收集管 | 50套 |
自備試劑:無水乙醇
產品特點
1、適用于凝固血液樣本的高純度總DNA分離純化。
2、無需有機溶劑提取以及乙醇沉淀,徹底去除污染物及下游反應抑制物,快速提取高品質DNA。
實驗前準備及重要注意事項:
1、向蛋白酶K 中加入1.25ml 蛋白酶K 儲存液使其溶解,-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿長時間室溫放置,避免反復凍融,避免反復凍融,以免影響其活性。
2、次使用前應按照試劑瓶標簽的說明在Buffer GW1和Buffer PW2中加入無水乙醇,混合均勻,并在試劑瓶標簽上做好標記。
3、使用前請檢查Buffer GTL和Buffer GC是否出現結晶或者沉淀,如有結晶或者沉淀,請將Buffer GC和Buffer GTL于56℃水浴重新溶解
4、將一個水浴鍋預熱至56℃,另一個水浴鍋預熱至70℃。
5、可將洗脫緩沖液Buffer GE預熱至70℃。
操作步驟:
1、向1.5ml離心管中加入20μl 蛋白酶K 溶液,然后再加入180μl Buffer GTL。
注意:若樣品數量較多,蛋白酶K 和Buffer GTL可按比例混合,然后將200μl混合物加入到1.5ml的離心管中。
2、將取下的干血片放入上一步中的離心管中,劇烈渦旋混勻并短暫離心。56℃孵育30-60分鐘,期間每隔10分鐘將離心管渦旋10秒。
3、加入200μl Buffer GC,徹底渦旋混勻。短暫離心后,70℃孵育10分鐘,期間每隔3分鐘將離心管渦旋10秒。
注意:加入Buffer GC后可能會產生白色沉淀,大部分情況下,在孵育過程中,沉淀會消失,沉淀不會影響后續的實驗。
4、待步驟3離心管中樣品降為室溫后加入100μl無水乙醇,輕輕顛倒混勻樣品,室溫放置5分鐘。短暫離心,將管壁內壁的液體富集于離心管底。
注意:
1)需要將樣品和乙醇混合均勻。
2)當室溫高于25℃時,需要先將乙醇預冷。
5、將上一步所得溶液全部加入到已裝入收集管的吸附柱中,12000rpm(~13400×g)離心1分鐘。倒掉收集管中的廢液,將Spin Column DC放回收集管中。
6、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前檢查是否已加入無水乙醇),12000rpm離心1分鐘。倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer PW2(使用前檢查是否已加入無水乙醇),12000rpm離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。
8、重復步驟7。
9、12000rpm離心2分鐘,倒掉廢液,將吸附柱置于室溫放置2-5分鐘,以徹底晾干吸附材料中殘余的乙醇。
注意:這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除,乙醇的殘留會影響后續的酶促反應(酶切、PCR等)。
10、將吸附柱置于一個無菌的1.5ml離心管中,向吸附柱的中間部位懸空加入20-100μl BufferGE,室溫放置2-5分鐘。12000rpm離心1分鐘,收集DNA溶液,-20℃保存DNA。
注意:
1)如果下游實驗對pH值或EDTA敏感,可以用去離子水洗脫。洗脫液的pH值對洗脫效率有很大影響,若用去離子水做洗脫液應該保證其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH將水的pH值調到此范圍),pH值低于7.0時會降低洗脫效率。
2)離心前室溫孵育5分鐘可以增加產量;用另外的20-200μl Buffer GE再次洗脫可以增加產量。
3)如果要提高DNA的終濃度,可以將步驟10所得的DNA洗脫液重新加至吸附膜上,室溫放置5 min后再次離心;若洗脫體積小于20μl,可以增加DNA的終濃度,但可能會減少總產量。如果DNA的量小于1μg,推薦用50μl Buffer GE或去離子水洗脫。
4)因為保存在水中的DNA會受到酸性水解作用的影響,如需長期保存,推薦用Buffer GE洗脫并于-20℃保存。
儲存條件:室溫(15~30℃)。
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動物毛發不容易降解,同時含有大量的線粒體,所以是考古研究、法醫研究和線粒體研究等領域的重要性實驗材料。目前市場上專門用于毛發樣品DNA提取的產品很少,為此我們研發了本產品。
產品特點:
1.充分的酶法降解和快速的柱式提取相結合,前者使DNA充分釋放,后者使雜質充分被去除。
2.DNA回收率一般在0.5μg/100mg左右(理論產率一般是0.1-1.5μg之間)。
3.DNA純度高,OD比值一般在1.6-1.8之間。
4.提取的DNA能夠用于電泳、酶切、雜交檢測和PCR。
5.適合于動物的各種毛發。
試劑盒組成:
| 成分 | 規格 |
| 溶液A | 50mL |
| 蛋白酶K溶液(10mg/ml) | 1mL |
| 溶液B | 15mL |
| 溶液C | 50mL |
| 離心吸附柱(15層膜) | 50套 |
| 通用洗柱液 | 50mL |
| DNA洗脫液 | 5mL |
| 說明書 | 1份 |
儲存條件:常溫運輸及保存(蛋白酶K溶液需要-20℃保存),有效期一年。
使用方法:
1.將30-50mg左右毛發充分剪碎(成芝麻大小就可以),zuì后轉移到一個干凈的1.5mL塑料離心管中。注意:zuì好從靠近根部的地方剪取樣品。
2.加入1mL溶液A(使用之前需取本次實驗所需的溶液A現加入自備的β-巰基乙醇,β-巰基乙醇的終濃度為5%)和20μL蛋白酶K溶液(20mg/mL),37℃保溫10小時(一般過夜保溫就可以)。
注意:zuì好讓反應體系處于搖晃狀態,此保溫長度一般可以讓毛發溶化。
3.加入0.3mL的溶液B和0.2mL的自備氯fǎng,振蕩器上振蕩30秒充分混勻。
4.12000rpm室溫離心3分鐘,小心將上清轉移到新的1.5mL塑料離心管中。
5.在上清液中加入等體積的溶液C,上下顛倒30秒充分混勻。
6.將混合液分兩次轉移到離心吸附柱中。每次是先將0.7-0.8mL混合液轉移到離心吸附柱中,室溫放置2分鐘,12000rpm室溫1分鐘,棄穿透液。再把剩余的一半上柱,重復此操作。
7.將0.7mL通用洗柱液加入到離心吸附柱中,12000rpm室溫離心半分鐘,棄穿透液。
8.將0.3mL通用洗柱液加入到離心吸附柱中,12000rpm離心半分鐘(此步為第二次洗滌,一般可以省略)。
9.空甩離心吸附柱半分鐘去除殘留液體。
10.將離心吸附柱放置在一新的1.5mL塑料離心管中,加入30μL通用洗脫液。
11.12000rpm離心1分鐘,管底即為毛發DNA溶液,可立即用于PCR,也可長期保存在-20℃。
注意:由于頭發中DNA的含量十分少,所以電泳檢測時即使全部上樣也只能看見十分微弱的DNA條帶。
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