RFT035 動物組織細胞DNA提取試劑盒
- 產品/服務：RFT035 動物組織細胞DNA提取試劑盒
- 型 號：RFT035
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-04-03
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：976
產品簡介
動物組織細胞DNA提取試劑盒的品牌是百奧萊博，是優質的DNA提取純化產品，本制品用于科研目的，本品質量穩定，價位合理，需要動物組織細胞DNA提取試劑盒等DNA提取純化產品的客戶，請到我公司官網聯系我們。...
產品詳細介紹
特別提示：包括動物組織細胞DNA提取試劑盒在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
產品名稱：動物組織細胞DNA提取試劑盒
英文名稱：Animal tissue cell DNA Extraction Kit
產品貨號：RFT035
產品規格：50次|100次
本試劑盒采用可以特異性結合DNA的離心吸附柱和獨特的緩沖液系統，能提取多種細胞/組織中的基因組DNA。離心吸附柱可以、專一吸附DNA，可zuì大限度去除雜質蛋白及細胞中其他有機化合物。提取的基因組DNA片段大，純度高，質量穩定可靠。使用本試劑盒回收的DNA可適用于各種常規操作，包括酶切、PCR、文庫構建、Southern雜交等實驗。
提取效率：
動物細胞培養液(樣本量10^6～10^7)：5～30 μg
動物組織(樣本量30mg)：10～30μg
試劑盒組分;
| 組份 | 50次 | 100次 | 貯存方式 |
| 緩沖液GA | 15 ml | 30 ml | 室溫 |
| 緩沖液GB | 15 ml | 30 ml | 室溫 |
| 去蛋白液GD(濃縮液) | 18 ml | 36 ml | 室溫 |
| 漂洗液PW(濃縮液) | 25 ml | 25ml | 室溫 |
| 洗脫緩沖液EB | 15 ml | 15 ml | 室溫 |
| 蛋白酶K(20 mg/ml) | 1ml | 2×1ml | -20℃ |
| RNase A(10 mg/ml) | 0.5 ml | 1 ml | -20℃ |
| 吸附柱CG | 50個 | 100個 | 室溫 |
| 收集管(2 ml) | 50個 | 100個 | 室溫 |
| 說明書 | 1份 | 1份 |
準備工作：
1. 準備55℃和70℃水浴；無水乙醇；1.5ml滅菌離心管。
2. 按照標簽所示在去蛋白液GD和漂洗液PW中加入無水乙醇，混勻后蓋緊瓶蓋后室溫貯存備用。
3. 每次使用前請檢查緩沖液GA，緩沖液GB和去蛋白液GD是否有沉淀生成，如果出現沉淀，37℃溫浴至沉淀溶解后再使用。
操作步驟：
如非指出，所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。
1、處理材料：
a. 培養細胞：貼壁培養的細胞應先處理為細胞懸液(如用PBS緩沖液或類似緩沖液)，10,000 g離心1分鐘，倒盡上清，加入200μl緩沖液GA，振蕩至徹底懸浮。
b. 組織：取約30mg動物組織(脾組織用量應少于10 mg)加入到事先盛有200μl 緩沖液GA的1.5ml離心管中，用研磨杵徹底將組織研碎。
2、加入20μl蛋白酶K (20 mg/ml)溶液。
a. 提取細胞基因組時，加入蛋白酶K混勻后，55℃放置5-10分鐘。
b. 提取組織基因組時，加入蛋白酶K混勻后，在55℃放置，直至組織溶解。
注：不同組織裂解時間不同，通常需1-3小時即可完成(鼠尾需要消化過夜),期間間歇顛倒混勻樣品。
3、加入10μl RNaseA(10 mg/ml)溶液，混勻后室溫放置2分鐘。
4、加入220μl緩沖液GB，充分顛倒混勻，70℃放置10分鐘，溶液應變清亮，簡短離心以去除管蓋內壁的水珠。
注：加入緩沖液GB時可能會產生白色沉淀，一般70℃放置一段時間后會消失。如溶液未變清亮，說明細胞裂解不徹底，會影響DNA的純度和得率，而且可能導致步驟6中離心柱堵塞。
5、加入220μl 無水乙醇，顛倒混勻，簡短離心以去除管蓋內壁的水珠。
注：加入乙醇后會產生絮狀沉淀，可用槍頭反復抽打1-2次將沉淀弄碎后再上柱。如果絮狀物未做處理，容易導致步驟6中離心柱的堵塞。
6、將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個吸附柱CG中(吸附柱放入收集管中)，11000g離心2分鐘，倒掉廢液，吸附柱CG放回收集管中。
注：如果出現吸附柱堵塞現象，可將離心時間延長到5分鐘。
7、向吸附柱CG中加入500μl去蛋白液GD(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)，11000g離心1分鐘，倒掉廢液，吸附柱CG放入收集管中。
8、向吸附柱CG中加入700μl 漂洗液PW(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)，11000g離心1分鐘，倒掉廢液，吸附柱CG放入收集管中。
9、向吸附柱CG中加入500μl 漂洗液PW(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)，11000g離心1分鐘，倒掉廢液。
10、將吸附柱CG放回廢液收集管中，11000g離心2分鐘。
注：此步驟非常重要，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除。漂洗液中乙醇的殘留會影響后續的酶反應(酶切、PCR等)實驗。
11、將吸附柱CG轉入一個干凈的離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加100μl經70℃水浴預熱的洗脫緩沖液EB，室溫放置2分鐘，11000g離心2分鐘。
注意：
a.洗脫緩沖液體積zuì好不少于100μl，體積過小影響回收效率。
b.洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液應保證其pH值在7.0-8.5范圍內，pH值低于7.0會降低洗脫效率。
12、DNA產物-20℃保存。
儲存條件：室溫，有效期12個月。
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名稱：非凍型尿液DNA保存液
貨號：BTN90315
規格：100mL
本品在室溫條件下長期保存用于DNA提取的尿液樣品保存液。它能夠、長期保證DNA分子的完整性。
產品特點：
1. 保存時間長，可室溫保存尿液DNA長達六個月，尤其適合于野外尿液樣品采集。
2. DNA完整性好，純化后長度在20-50 Kb之間。
3. DNA無化學修飾，提得的DNA可用于酶切、電泳、Southern雜交和PCR等分子生物學實驗。
4. 能防止尿液在4℃結晶。
5. 安全可靠，本產品無害。
6. 使用簡單，直接把新鮮的尿液樣品與本產品混合即可。
儲存條件：室溫運輸及保存，有效期兩年。
使用方法：(以DNA提取為例)
1. 迅速將尿液與本產品按10:1的比例混合。
2. 常溫閉光保存直到使用。
3. 使用常規液體DNA提取方法提取DNA即可。推薦使用柱式尿液DNA提取試劑盒(BTN90314)，使用柱式尿液DNA提取試劑盒提取本產品保存的尿樣，兼容性好，提取效率更高。
4. 提取得到DNA可用于酶切、電泳、Southern雜交和PCR等分子生物學實驗。
名稱：菌體內毒素清除劑
貨號：BTN90901
規格：200mL
內毒素是E.coli細胞壁的主要成分，傳統的去除內毒素的方法是將內毒素和DNA一起純化出來，然后再用各種方法去除其中的內毒素，操作繁瑣，DNA 回收率低。本產品可以直接把E.coli 表面的內毒素去除，從根本上避免了內毒素對后續操作(如質粒DNA提取，重組蛋白質提取)的污染。
產品特點：
1. 個在菌體收集階段去除內毒素的產品，從源頭上避免了內毒素跟DNA和胞漿蛋白的接觸，從根本上防止了可能產生的污染。
2. 操作簡單快速，用酶溶液溫和清洗菌體3-4次即可去掉細菌表面的內毒素，只需要10分鐘左右時間，不需要復雜儀器設備。
3.，能去除99%以上的內毒素。
4.跟各種質粒DNA提取、基因組DNA提取和蛋白質提取等操作兼容，DNA丟失率只有10%左右(其他方法DNA 丟失率可以高達50%)。
5. 不影響DNA和大部分蛋白質的活性，處理過的質粒DNA可用于轉染實驗。
6. 既可小規模使用(在1.5mL離心管內)，也可放量用于大規模無內毒素質粒DNA提取和無內毒素蛋白質純化。
儲存條件：常溫運輸和保存，有效期一年。
使用方法：
一：用于菌液小于3mL的樣品
1. 收集1.5-3mL E.coli 飽和菌液，12000rpm離心1分鐘，棄上清，得到細菌沉淀。
2. 加入1mL 本產品溫和混勻后10,000-12000rpm離心1分鐘，棄上清(含內毒素)。
3. 再重復上述操作3-4次，得到的菌體可以直接進入后續的無內毒素質粒DNA提取或無內毒素蛋白質提取程序。
二：用于菌液多于3mL的樣品
整個操作同上，只是在15或50mL塑料離心管中進行，離心速度不能超過離心管的承受力，本產品的用量按比例增加。
疑難解答：
Q:為何用常規的方法很難去除生物樣品中的內毒素?
A:因為內毒素帶電性跟DNA和部分蛋白質相同，所以基于帶電性的分離方法(如硅膠膜吸附，離子交換吸附)不能將它們分開;同時內毒素又是雙性分子(類似于細胞膜的磷脂分子)，能夠形成大小不等的聚合物，跟質粒DNA和蛋白質大小接近，所以基于分子量大小的分離方法(如凝膠排阻過濾和氯化銫超速離心)也不能將其有效分離。
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