CZ013 Protein G磁珠抗體純化試
- 產品/服務：CZ013 Protein G磁珠抗體純化試
- 型 號：CZ013
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-04-03
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：1208
產品簡介
北京百奧萊博供應的Protein G磁珠抗體純化試用于科研試驗，Protein G磁珠抗體純化試是我司眾多優質抗體制備及分型之一，質量堪比同類進口產品，價格非常優惠，目前正熱烈促銷中，恭候您的咨詢訂購。...
產品詳細介紹
特別提示：包括Protein G磁珠抗體純化試劑盒在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
產品名稱：Protein G磁珠抗體純化試劑盒
英文名稱：ProteinG Antibody Purification
產品貨號：CZ013
產品規格：5ml/100ml/500ml
產品簡介：
Protein A(or Protein G)抗體純化磁珠系列產品是由NHS活化的超順磁性微球與Protein A(or Protein G)共價結合形成的復合微粒。與當前免疫磁珠市場上同類產品相比，該產品具有更高的抗體結合能力和較低的蛋白非特異吸附率，洗脫條件更均一，一步純化即可從血清樣品中分離出純度大于90%的抗體。
本產品為微米級磁性微球，熟練操作可在15 min內完成抗體吸附過程，30 min內完成抗體純化流程。本產品可重復使用，適用于血漿、腹水、組織培養上清液等樣品中的抗體純化，也可用于抗體固定及其它相關研究。用戶可根據目標抗體的種屬來源及亞型選擇磁珠的類別，Protein A，Protein G磁珠與不同抗體的親和性比較參見附表1。
操作流程(以純化人血清IgG為例)：
1. 樣品處理：取人血清100 μL至1.5 mL EP管中，接著加入900 μL Binding/Washing buffer，充分混勻。
2. 磁珠預處理：將抗體純化磁珠漩渦振蕩30 s，使磁珠充分重懸；取200 μL 10%(v/v)磁珠懸液置于另一新的1.5 mL EP管中。對磁珠懸液進行磁性分離，棄上清液，用1 mL Binding/Washing buffer洗滌2次，磁性分離，管中磁珠可直接用于抗體分離。
注：該步驟磁珠的用量可根據磁珠對目標抗體的zuì大結合量進行調節，當目標抗體的濃度大于150μg/mL時，用戶可取1.2～1.5倍磁珠用量(計算方式：如1.5*樣品中目標抗體含量/磁珠zuì大結合量)，若目標抗體濃度過低，如低于70 μg/mL時，客戶為了提高抗體回收率，可增加磁珠用量，如提高至3倍磁珠用量。
3. 抗體吸附：在步驟2預處理的磁珠管中加入步驟1處理的樣品溶液，漩渦振蕩均勻，在室溫下(約25℃)置于翻轉混合儀或者手工輕輕翻轉EP管，促使樣品和磁珠充分接觸并吸附，翻轉約15 min后進行磁性分離，移棄上清液。
4. 磁珠洗滌：向EP管中加入1 mL Binding/Washing buffer，振蕩重懸磁珠后進行磁性分離，移棄上清液；該操作重復3次。
5. 抗體洗脫：在上述完成磁珠洗滌的EP管中加入0.5～1.0 mL Elution buffer，用移液器吹打或者渦旋震蕩下迅速重懸，然后在室溫下(約25℃)置于翻轉混合儀或者手工輕輕翻轉EP管，翻轉10 min后進行磁性分離，收集上清液至新的EP管。
注意事項：該步驟Elution buffer用量，建議客戶使zuì終洗脫的抗體濃度控制在0.6～1.2 mg/mL，此時第1次洗脫條件中95%以上的抗體將被洗脫下來；若Elution buffer用量過少，會導致部分抗體在第1次洗脫時仍然留在磁珠上，從而導致抗體回收率降低。
6. 抗體中和：在步驟5抗體洗脫液中加入一定量的Neutrilization buffer，一般為抗體洗脫體積的1/10，zuì終使洗脫的抗體pH值保持中性環境，以利于維持抗體的生物活性，避免抗體失活。
7. 磁珠后處理：使用后的磁珠用Elution buffer洗滌2次，磁性分離，棄上清液；接著用Binding/Washing buffer洗滌3次，磁性分離，棄上清液，加入200 μL Storage buffer重懸磁珠 ，置于2～8℃保存。
磁珠再生：
1. 磁珠多次使用后會有沉淀蛋白、強疏水性蛋白、脂蛋白等雜質非特異性吸附到磁珠上，為了保證磁珠的使用效率，建議持續使用5次后進行磁珠再生處理。
2. 按約每1 mL 10%(v/v) 磁珠加入1 mL 1%(v/v)Triron X-100磁珠再生緩沖液，振蕩均勻，在室溫下置于翻轉混合儀或者手工輕輕翻轉混合，10 min后進行磁性分離，棄上清液。
3. 立即加入1 mL Binding/Washing buffer進行重懸，然后磁性分離，棄上清液，重復該操作3次。
4. 加入1 mL Storage buffer重懸磁珠 ，置于2～8℃保存。
注意事項：
1. 進行抗體純化操作之前，請務必認真閱讀本操作說明書。
2. 本產品須與磁性分離器配套使用。
3. 磁珠使用前應充分振蕩均勻。
4. 磁珠應保存在儲存溶液中，防止干燥。
5. 請勿將磁珠冷凍或離心，以免引起不可逆聚集。
6. 本產品僅供研究使用。
常見問題及解答(FAQ)：
Q1：如何提高抗體與磁珠結合效率?
A1： 磁珠與抗體的結合效率與抗體的種屬來源及所屬亞型有關，請確認抗體的類型與Protein A配基的親和效率(附表1)，如抗體所屬亞型與Protein A的親和度較低，可以通過增加抗體與磁珠的孵育時間(30～120 min)、提高結合緩沖液的pH值(8～9)及降低離子強度(25～100 mM NaCl)等方法提高親和效率，或選擇與目標抗體具有更高親和度的配基(如Protein G或Protein A/G)。
Q2：如何提高抗體洗脫效率？
A2：抗體與Protein A配基親和度太高導致抗體洗脫效率低，可以通過降低洗脫緩沖液的pH值(1.9～2.5)、增大洗脫緩沖液的離子強度(可選用2～3 M MgCl2)或延長洗脫時間，提高抗體的洗脫效率。但應注意抗體在低pH條件下容易形成聚集物，抗體洗脫產物應馬上用堿性緩沖劑(如Tris、HEPES等)調節pH至中性。
Q3：如何避免磁珠在儲存或使用過程中可能出現的聚集情況？
A3：磁珠應保存在2～8℃，使用時應避免由于污染而導致的不可逆聚集，或因干燥而導致的聚集。磁珠在低pH的洗脫緩沖液中發生聚集屬于正常現象，不影響磁珠的正常使用。在Binding/Washing buffer和Elution buffer中添加終濃度為0.1%(v/v)的非離子型去垢劑(如NP-40、Tween-20或Triton X-100)可有效防止磁珠聚集。經過低pH洗脫操作的磁珠可以用Binding/Washing buffer和Elution buffer洗滌至中性，并用超聲波水浴處理2 min，即可使磁珠恢復均勻狀態，以上處理均不影響磁珠的抗體結合效率。
Q4：如何解決磁珠易粘附管壁的現象？
A4：建議使用低吸附率的耗材進行磁珠操作。另外，在緩沖液中添加0.01%～0.1%(v/v)的非離子型去垢劑(如NP-40、Tween-20或Triton X-100)可以有效降低磁珠對耗材的粘附。
Q5: 磁珠在使用過程中出現結塊現象？
A5：磁珠在使用時如果出現結塊現象一般較難振蕩打散，容易導致分布不均，出現該問題的原因是磁珠在磁場中放置太久而使磁珠牢固的結合在一起。用超聲波水浴處理2 min即可打散磁珠使其重新分散，但應注意超聲處理也會使磁珠在樣品溶液中捕獲的抗體脫落，所以磁珠在加樣后洗脫前不宜使用該方法。
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