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產品詳情

Y15017 大孔樹脂NKA-9

  • 產品/服務:Y15017 大孔樹脂NKA-9
  • 型 號:Y15017
  • 品 牌:百奧萊博
  • 單 價:面議 
  • 更新日期:2023-06-29
  • 有效期至:長期有效
  • 瀏覽次數:935
產品簡介

北京百奧萊博供應的大孔樹脂NKA-9用于科學研究,我公司的大孔樹脂NKA-9品質上佳,經過多年的開發(fā)生產,已然非常成熟,歡迎廣大新老客戶訂購。...

產品詳細介紹

特別提示:包括大孔樹脂NKA-9在內,本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!


產品名稱:大孔樹脂NKA-9
產品貨號:Y15017
產品規(guī)格:250g

儲存條件:RT
外觀:顆粒

根據您的關注的大孔樹脂NKA-9,您可能還對以下產品有需求:

貨號 名稱 規(guī)格
QN3989 CM-葡聚糖凝膠C-25 25g|100g
QN4053 蛋白A瓊脂糖凝膠親和層析介質 2ml
QN4058 DEAE葡聚糖凝膠A-50 25g
Y13323 葡聚糖凝膠G-75 25g
Y13364 葡聚糖T10 10g|500g
Y13377 淋巴細胞分離液 200ml
Y14497 硅膠 500g


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名稱:聚酰胺(30~60目)
貨號:QN3994
規(guī)格:500g

名稱:谷胱甘肽-瓊脂糖凝膠4FF
貨號:QN4066
規(guī)格:10ml
pGEX載體表達的外源蛋白與谷胱甘肽S-轉移酶融合,因此可以通過谷胱甘肽-瓊脂糖親和層析進行純化。GSTs是一類以谷胱甘肽(γ-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸)作為底物,通過形成硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。由于GST對底物的親和力是亞毫摩爾級的,因此谷胱甘肽固化于瓊脂糖形成的親和層析樹脂對GST及其融合蛋白的純化效率很高。可以用含游離谷胱甘肽的緩沖液洗脫結合GST融合蛋白。樹脂用3mol/L NaCl的緩沖液再生。谷胱甘肽瓊脂糖對GST融合蛋白的結合能力很強(每毫升柱床體積的樹脂能結合8毫克融合蛋白)。

技術參數:
粒度:45~165μm
流速:75cm/h
工作PH:pH4.0~10.0
耐壓:0.3Mpa
載量:>10mg谷胱甘肽S-轉移酶

使用說明:
一、谷胱甘肽樹脂的處理:
1.輕輕顛倒盛有谷胱甘肽-瓊脂糖樹脂的容器,將樹脂混成勻漿。
2.取部分勻漿放入15mL聚丙烯管(每100mL細菌培養(yǎng)物大約需要2mL勻漿)。
3.4℃ 500g離心5分鐘,小心去掉上清。
4.在樹脂中加入10倍柱床體積預冷的PBS,顛倒數次混勻,4℃ 500g離心5分鐘,小心去掉上清。
5.每毫升樹脂加入1毫升冷的PBS,制成50%勻漿,顛倒數次,混合均勻,懸液冰上放置待用。
二、制備細胞抽提物:
6.每100毫升培養(yǎng)物的細胞沉淀重懸于4mL PBS緩沖液中。
7.加入溶菌酶至終濃度為1mg/mL,冰上放置30分鐘。
8.用針筒將10mL濃度為0.2%的TritonX-100強行注入黏稠的細胞裂解物中,劇烈振動數次混勻。加入DNase和RNase至終濃度5μg/mL,4℃振動溫育10分鐘,4℃ 3000g離心30分鐘,去除不溶性細胞碎片,上清轉移到一只新管中,加入DTT至終濃度1mmol/L。
三、純化融合蛋白:
9.細胞裂解物與適量50%谷胱甘肽-瓊脂糖樹脂勻漿混和,每100毫升細菌培養(yǎng)物加2mL樹脂,于室溫輕搖30min。
10.混合物于4℃以500g離心5分鐘,小心去掉上清并留樣少許進行SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。
11.沉淀中加入10倍柱床體積的冷的PBS,顛倒離心管數次混勻,洗去未與樹脂結合的蛋白。
12.4℃以500g離心5分鐘,小心去掉上清并留樣少許進行SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。
13.重復步驟11和12兩次。
14.結合的GST融合蛋白可用谷胱甘肽洗脫液洗脫,也可用凝血酶、腸激酶或Xa因子切割,釋放靶蛋白。
四、用谷胱甘肽洗脫融合蛋白:
15.沉淀中加入1倍柱床體積的谷胱甘肽洗脫緩沖液,室溫輕輕攪動10min,洗脫樹脂上結合的蛋白。
16.4℃以500g離心5分鐘,上清(含洗脫的融合蛋白)移至新管中。
17.重復步驟a和b兩次,合并3次上清。蛋白酶解從結合的GST融合蛋白上回收靶蛋白:
18.在結合了融合蛋白的樹脂中加入凝血酶、腸激酶或Xa因子(根據融合蛋白中的位點選擇),每mL樹脂加入50單位溶于1mL PBS的蛋白酶。顛倒離心管數次混勻,室溫下振蕩2~16小時。用小規(guī)模實驗確定時間。
19.4℃以500g離心5分鐘,上清小心移至新管中。(GST仍結合在樹脂上,而靶蛋白在上清中,蛋白酶也在上清中,仍需要分離)
20.10% SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分析每一步樣品的蛋白質組成。
  試劑配制:
  谷胱甘肽洗脫緩沖液:10mmol/L還原型谷胱甘肽,50mmol/L Tris-Cl(pH8.0)

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電話:18518407031

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