BTN120510 ATP依賴的DNase
- 產品/服務：BTN120510 ATP依賴的DNase
- 型 號：BTN120510
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-06-29
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：923
產品簡介
ATP依賴的DNase的品牌是百奧萊博，是優質的工具酶產品，本制品用于生化實驗研究等領域，本品質量穩定，價位合理，需要ATP依賴的DNase等工具酶產品的客戶，請到我公司官網聯系我們。...
產品詳細介紹
特別提示：包括ATP依賴的DNase在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
產品名稱：ATP依賴的DNase
英文名稱：ATP Dependent Dnase
產品貨號：BTN120510
產品規格：200U
在含有ATP的Buffer反應體系中，本產品能夠特異性地水解線性雙鏈DNA產生脫氧核糖核酸，但對環狀雙鏈DNA不起作用。本產品可用于除去質粒或粘粒等環狀DNA樣品中殘留的少量線性基因組DNA片段的污染，減少對后續實驗的影響。在基因工程實驗中，制備的質粒和粘粒，即使是通過氯化銫/溴乙錠梯度離心方法或其它嚴格的方法制備，也常含有堿裂解操作過程中帶來的少量細菌基因組DNA片段的污染，尤其在制備低拷貝克隆載體的質粒或粘粒等時，這種現象更為明顯，使用本產品即可以有效的去除這些污染。
產品特點：
1．使用本制品可以有效除去樣品中的基因組DNA，然后通過70℃、5 min的加熱處理即可使酶完全失活，從而減少基因組污染物對質粒或粘粒等的常規分析、亞克隆和序列測定等后續實驗結果的影響。
2．此產品可用于低拷貝的質粒或粘粒的提取及除去質粒等環狀DNA中線性基因組DNA污染物。
儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。
活性定義：以線性化的pMD18 DNA為底物，在1mM ATP存在、pH9.4緩沖液中，37℃反應30分鐘，催化生成1nmol脫氧核苷酸所需要的酶量，定義為1活性單位。在10μL反應體系中，加入本產品0.2 U，10×ATP依賴的DNA酶Buffer 1μL，0.2μg的線性化的pMD18 DNA，在37℃條件下反應30分鐘，能夠使線性化的pMD18 DNA產生95%以上的降解作用。
使用方法：
使用本產品除去 pUC18質粒中含有的大腸桿菌基因組DNA片段污染物(占60%)，可以提高陽性克隆的比率。
1．在微量離心管中配制下列反應液：
| 成分 | 樣品 | 對照 |
| 10×反應Buffer | 1μL | 1μL |
| pUC18質粒DNA混合物 | 1μg | 1μg |
| ATP依賴的DNA酶 | 2U | - |
| dH2O | Up to 10μL | Up to 10μL |
2．37℃反應2小時。長時間反應效率有下降的傾向，建議反應時間1～2小時。
3．70℃加熱5分鐘，使ATP依賴的DNA酶失活。
4．在微量離心管中制備下列酶切反應液：
| 成分 | 用量 |
| 10×H Buffer(客戶自備) | 1μL |
| 第3步反應液 | 5μL |
| EcoR I(客戶自備) | 30U |
| dH2O | Up to 10μL |
5．37℃反應1小時之后，進行60℃ 15 min反應，使EcoR I失活。
6．在微量離心管中制備下列連接反應液：
| 成分 | 用量 |
| 10×T4 DNA Ligase Buffer(客戶自備) | 1μL |
| 第5步酶切反應液 | 2μL |
| T4 DNA Ligase(客戶自備) | 350 U |
| dH2O | Up to 10μL |
7．16℃反應1小時。
取上述連接反應液2～10μL，轉化到JM109感受態細胞中，涂平板培養，進行藍白菌落篩選并計數。實驗結果表明，使用ATP依賴的DNA酶處理的pUC18質粒DNA混合物(含60％大腸桿菌基因組DNA片段)的自連結果中，白色菌落減少80%以上，有效抑制了大腸桿菌基因組DNA的污染。
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