北京百奧萊博供應(yīng)的高純質(zhì)粒少量提取試劑盒用于科學(xué)研究，我公司的高純質(zhì)粒少量提取試劑盒品質(zhì)上佳，經(jīng)過(guò)多年的開(kāi)發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購(gòu)。...

特別提示：包括高純質(zhì)粒少量提取試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：高純質(zhì)粒少量提取試劑盒
英文名稱：High Purity Plasmid mini Extraction Kit
產(chǎn)品貨號(hào)：WH0035
產(chǎn)品規(guī)格：50次

本試劑盒在離心柱型質(zhì)粒提取試劑盒基礎(chǔ)上，增加了本公司特制的過(guò)濾柱CS，可在提取質(zhì)粒的同時(shí)去除痕量蛋白及其它雜質(zhì)，提取的高純度質(zhì)粒DNA可多至70μg，適用于需較大量質(zhì)粒的動(dòng)物細(xì)胞轉(zhuǎn)染等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
·高純度：提取的質(zhì)粒DNA可直接用于轉(zhuǎn)染等高要求實(shí)驗(yàn)。
·快速：步驟少，操作簡(jiǎn)單，節(jié)省時(shí)間。
·高 效：可提取菌體85%以上質(zhì)粒DNA。

質(zhì)粒得率：

質(zhì)粒類型	處理量	得率	質(zhì)粒
高拷貝質(zhì)粒	5-15ml	15-70μg	pTZ,pUC,pBS,pTG-T
低拷貝質(zhì)粒	5-15ml	5-25μg	pBR322,pACYC及其衍生載體pSC101 及其衍生載體，SuperCos,pWE15

試劑盒組成：

組分	50T
平衡液BL	30ml
溶液P1	30ml
溶液P2	30ml
溶液P3	40ml
去蛋白液PD	30ml
漂洗液PW	15ml
洗脫緩沖液TB	15ml
RNaseA（10mg/ml)	300μl
過(guò)濾柱CS	50個(gè)
吸附柱CP4	50個(gè)
收集管（2ml)	100個(gè)

保存條件：室溫（15-25℃)干燥條件下，可保存12個(gè)月；更長(zhǎng)時(shí)間的保存可置于2-8℃。2-8℃保存條件下，若溶液產(chǎn)生沉淀，使用前應(yīng)先將試劑盒內(nèi)的溶液在室溫中放置一段時(shí)間，必要時(shí)可在37℃水浴中預(yù)熱10min以溶解沉淀。單獨(dú)包裝的RNase A在室溫可穩(wěn)定保存12個(gè)月。加入RNase A和BaiRed后的溶液P1應(yīng)置于2-8℃保存，可穩(wěn)定保存6個(gè)月。

注意事項(xiàng)：（請(qǐng)務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項(xiàng))
1．溶液P1在使用前先加入RNaseA（將試劑盒中提供的RNase A全部加入），混勻，置于2-8℃保存。
2．使用前先檢查平衡液BL、溶液P2和P3是否出現(xiàn)渾濁，如有渾濁現(xiàn)象，可在37℃水浴中加熱幾分鐘，即可恢復(fù)澄清。
3．注意不要直接接觸溶液P2和P3，使用后應(yīng)立即蓋緊蓋子。
4．所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)室溫下進(jìn)行離心，速度為12000rpm （~13400×g )。
5．提取的質(zhì)粒量與細(xì)菌培養(yǎng)濃度、質(zhì)粒拷貝數(shù)等因素有關(guān)。如果所提質(zhì)粒為低拷貝質(zhì)粒或大于10kb的大質(zhì)粒，應(yīng)加大菌體使用量，同時(shí)按比例增加P1、P2、P3的用量，洗脫緩沖液應(yīng)在65-70℃預(yù)熱。可以適當(dāng)?shù)难娱L(zhǎng)吸附和洗脫的時(shí)間，以增加提取效率。
6．實(shí)驗(yàn)前使用平衡液BL處理吸附柱，可以zuì大限度激活硅基質(zhì)膜，提高得率。
7．用平衡液BL處理過(guò)的柱子zuì好當(dāng)天使用，放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)影響效果。

使用方法：
使用前請(qǐng)先在漂洗液PW中加入無(wú)水乙醇，加入體積請(qǐng)參照瓶上的標(biāo)簽。

1．柱平衡步驟：向吸附柱CP4中（吸附柱放入收集管中）加入500μl的平衡液BL，12000rpm（~13400×g )離心1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。（請(qǐng)使用當(dāng)天處理過(guò)的柱子）
2．取5-15ml過(guò)夜培養(yǎng)的菌液加入離心管中，12000rpm （~13400×g )離心1 min，盡量吸除上清。
  注意：菌液較多時(shí)可以通過(guò)幾次離心將菌體沉淀收集到一個(gè)離心管中,菌體量以能夠充分裂解為佳，過(guò)多的菌體裂解不充分會(huì)降低質(zhì)粒的提取效率。
3．向留有菌體沉淀的離心管中加入500μl溶液P1 （請(qǐng)先檢查是否已加入RNase A），使用移液器或渦旋振蕩器徹底懸浮細(xì)菌細(xì)胞沉淀。
  注意：請(qǐng)務(wù)必徹底懸浮細(xì)菌沉淀，如果有未徹底混勻的菌塊，會(huì)影響裂解，導(dǎo)致提取量和純度偏低。
4．向離心管中加入500μl溶液P2，溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8次使菌體充分裂解。
  注意：溫和地混合，不要?jiǎng)×艺鹗帲悦獯驍嗷蚪MDNA。此時(shí)菌液應(yīng)變得清亮粘稠，所用時(shí)間不應(yīng)超過(guò)5 min，以免質(zhì)粒受到破壞。如果未變得清亮，可能由于菌體過(guò)多，裂解不徹底，應(yīng)減少菌體量。
5．向離心管中加入700 μl溶液P3，立即溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8次，充分混勻，此時(shí)會(huì)出現(xiàn)白色絮狀沉淀。12000rpm （~13400×g )離心10min，此時(shí)在離心管底部形成沉淀。
  注意：P3加入后應(yīng)立即混合，避免產(chǎn)生局部沉淀。如果上清中還有微小白色沉淀，可再次離心后取上清。
6．將上一步收集的上清液分次加入過(guò)濾柱CS（過(guò)濾柱放入收集管中），12000rpm（~13400×g )離心2 min，小心地將離心后收集管中得到的溶液分次加入吸附柱CP4中（吸附柱放入收集管中），（如果過(guò)濾柱中有殘余的液體說(shuō)明步驟5吸取的上清中雜質(zhì)過(guò)多，可以延長(zhǎng)離心的時(shí)間；如果離心后收集管底部有少量的沉淀，盡量地吸取上清）。
7．12000rpm （~13400×g )離心1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CP4放入收集管中。
8．向吸附柱CP4中加入500μl去蛋白液PD，12000rpm （~13400×g )離心1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CP4放入收集管中。
9．向吸附柱CP4中加入600 μl漂洗液PW（請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇），12000rpm（~13400×g )離心1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CP4放入收集管中。
  注意：加入漂洗液PW后，如果室溫靜置2-5 min，有助于更好地去除雜質(zhì)。
10．重復(fù)操作步驟9。
11．將吸附柱CP4重新放回收集管中置于12000rpm （~13400×g )離心2 min，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除。
  注意：漂洗液中乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶反應(yīng)（酶切、PCR等）實(shí)驗(yàn)。為確保下游實(shí)驗(yàn)不受殘留乙醇的影響，建議將吸附柱CP4開(kāi)蓋，置于室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。
12．將吸附柱CP4置于一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加100-300 μl洗脫緩沖液TB，室溫放置2 min，12000rpm （~13400×g )離心1 min將質(zhì)粒溶液收集到離心管中。
  注意：洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于100 μl，體積過(guò)小影響回收效率。且DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防DNA降解，洗脫液的pH值對(duì)于洗脫效率有很大影響。若用ddH2O做洗脫液，應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5范圍內(nèi)，pH值低于7.0會(huì)降低洗脫效率。為了增加質(zhì)粒的回收效率，可將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，室溫放置2 min，12000rpm（~13400×g )離心2 min，將質(zhì)粒溶液收集到離心管中。

質(zhì)粒DNA濃度及純度檢測(cè)：
1．得到的質(zhì)粒DNA可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。電泳可能為單一條帶，也可能為2到3條DNA條帶，這主要與提取物培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)短、提取時(shí)操作劇烈程度等有關(guān)。OD₂₆₀值為1相當(dāng)于大約50 μg/ml雙鏈DNA。
2．OD₂₆₀/OD₂₈₀比值應(yīng)為1.7-1.9，如果洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液，而使用ddH2O，比值會(huì)偏低，但并不表示純度低，因?yàn)閜H值和離子存在會(huì)影響光吸收值。

根據(jù)您的關(guān)注的高純質(zhì)粒少量提取試劑盒，高純度質(zhì)粒小量提試劑盒，您可能還對(duì)以下產(chǎn)品有需求：



名稱：非凍型血液DNA保存液
貨號(hào)：BTN60910
規(guī)格：250mL
本品是在室溫條件下長(zhǎng)期保存用于DNA提取的血液樣品的保存液，它通過(guò)裂解細(xì)胞并抑制DNase的活性而達(dá)到長(zhǎng)期保證DNA分子的完整性。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 保存時(shí)間長(zhǎng)，可常溫保存血液DNA 長(zhǎng)達(dá)六個(gè)月，尤其適合于野外血液樣品采集。
2. DNA 完整性好，純化后長(zhǎng)度在20-50 Kb之間。
3. DNA 無(wú)化學(xué)修飾，提得的DNA可用于酶切、電泳、Southern雜交和PCR等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
4.適用于各種動(dòng)物血液(包括禽類血液)。
5. 安全可靠，本產(chǎn)品無(wú)害。
6. 使用簡(jiǎn)單，直接把新鮮的血液樣品與本產(chǎn)品混合即可。

儲(chǔ)存條件：室溫運(yùn)輸及保存，有效期兩年。

使用方法：

一: 哺乳動(dòng)物血液(包括人血液)
1. 將抗凝血(1-10mL)加入到適當(dāng)容量的塑料離心管中。
2. 加入等體積的血液DNAhold，充分振蕩混合均勻。
3. 常溫閉光保存直到使用。
4. 提取DNA時(shí)，可以取出部分液體，用自備的蛋白酶K(終濃度為0.1mg/mL)37℃處理過(guò)夜，然后再用經(jīng)典的酚/氯f(wàn)ǎng抽提+乙醇沉淀方法得到DNA。

二: 禽類血液
由于禽類血液有核細(xì)胞量遠(yuǎn)高于哺乳動(dòng)物，血液的使用量很少，一般只有哺乳動(dòng)物血液用量的1/100 到1/1000，所以需先用等體積的水將血液DNAhold稀釋，然后直接將禽類血液加入。其余操作同上。

名稱：血液細(xì)胞核DNA和線粒體DNA共提試劑盒
貨號(hào)：BTN120810
規(guī)格：25次
本試劑盒是在本公司血液DNA提取試劑盒產(chǎn)品基礎(chǔ)上開(kāi)發(fā)的、專門用于從新鮮或冷凍的哺乳動(dòng)物抗凝全血中同時(shí)提取細(xì)胞核DNA和線粒體DNA的試劑。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1.一份樣品可以同時(shí)得到細(xì)胞核DNA和線粒體DNA，節(jié)約寶貴的實(shí)驗(yàn)材料。
2. DNA產(chǎn)率高。細(xì)胞核DNA產(chǎn)率一般為30-50μg/mL 新鮮血液，線粒體DNA產(chǎn)率約為1μg/mL 新鮮血液。陳舊血液DNA產(chǎn)率差別較大。
3. DNA 純凈，OD260/OD280在1.8-2.0 之間，可直接用于PCR、酶切、雜交等實(shí)驗(yàn)。
4.適用于哺乳動(dòng)物血液，不適用于其他動(dòng)物血液。
5. 所用試劑安全，健康環(huán)保。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
紅細(xì)胞裂解液D型	250mL
溶液A	25ml
溶液B	2ml
溶液C	5ml
DNA 洗脫液2.0	10ml
說(shuō)明書(shū)	1份

儲(chǔ)存條件：常溫運(yùn)輸和保存，保存期限一年。

使用方法：

一：白細(xì)胞核和線粒體的分離
1. 將3mL 用EDTA 抗凝管收集的新鮮血液轉(zhuǎn)移到一個(gè)干凈的15mL塑料離心管中。注意：zuì好使用新鮮血液。對(duì)于陳舊血液，由于凍凝過(guò)程中冰晶已經(jīng)對(duì)細(xì)胞核膜和線粒體膜產(chǎn)生損傷，所以DNA 得率會(huì)大大減少，具體減少多少根據(jù)凍凝時(shí)間長(zhǎng)短不同而不同。
2. 向血液中加入等體積(3mL)的D型紅細(xì)胞裂解液；輕柔顛倒數(shù)次混勻，室溫靜置10分鐘以裂解紅細(xì)胞和白細(xì)胞的細(xì)胞膜，直至溶液變成清澈的紅色。注意：D型紅細(xì)胞裂解液一旦打開(kāi)后，非常容易污染細(xì)菌，未用完的部分zuì好-20℃保存，下次使用前，要溶解后充分搖勻。
3.室溫下1000 g離心10分鐘沉淀白細(xì)胞核。
4.轉(zhuǎn)移上清(含線粒體)到新的15mL塑料離心管中，注意不要觸及白細(xì)胞核沉淀。
5.在白細(xì)胞核沉淀中加入3mL D型紅細(xì)胞裂解液。輕柔顛倒數(shù)次混勻后，室溫下1000 g離心10分鐘以沉淀白細(xì)胞核。
6.轉(zhuǎn)移上清(含線粒體)到第4 步所得的、已經(jīng)含有上清的15mL塑料離心管中。
將白細(xì)胞核沉淀放置冰上，和即將準(zhǔn)備好的線粒體一起用于DNA提取，也可以放置在-20℃待用。
7. 將匯集的含線粒體的上清于4℃下15000g離心30分鐘。
8.小心移棄上清，小心將線粒體沉淀重懸在1mL D型紅細(xì)胞裂解液中，然后轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管中，15000g離心5分鐘，移棄上清得到線粒體沉淀。
9. 用1mL D型紅細(xì)胞裂解液洗滌線粒體2次(每次先重懸線粒體，再15000g離心5分鐘得沉淀)。
10. 所得線粒體可以直接用于DNA提取，也可放置在-20℃待用。

二：DNA的提取(下面步驟為白細(xì)胞核DNA提取和線粒體DNA提取通用)
11.在白細(xì)胞沉淀或線粒體沉淀中加入0.5mL溶液A，用移液槍吹打數(shù)次混勻后再加入75μL溶液B，混勻后于55℃溫育10分鐘。注意：溶液將成渾濁狀。
12. 再加入0.2mL溶液C充分顛倒混勻。
13.在4℃下13000g離心20分鐘后，將上清(含DNA)轉(zhuǎn)入一新的1.5mL塑料離心管中。
14. 加入兩倍體積的自備無(wú)水乙醇充分震蕩混勻后，室溫13000 g離心5分鐘，去盡上清。
15. 加入1mL 75%乙醇，充分混勻后室溫13000g離心5分鐘，去盡上清。
16. 重復(fù)上步一次。
17. 短暫離心，去盡殘留溶液(此步十分重要，不要省略)。
18. 短暫晾干半分鐘，加入適量DNA 洗脫液2.0 溶解DNA(對(duì)細(xì)胞核DNA，可加入500μL DNA 洗脫液2.0，對(duì)線粒體DNA，可加入50μL DNA 洗脫液2.0)。
19. 65℃保溫15分鐘以便徹底溶解DNA沉淀。溶解后的DNA可以立即用于后續(xù)的OD 檢測(cè)、酶切、PCR或其他實(shí)驗(yàn)，也可以放置在-20℃長(zhǎng)期保存。

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