對蝦白斑病毒是高品質(zhì)的動物疫病PCR檢測試劑盒產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應(yīng)，本產(chǎn)品用于科學(xué)研究，本產(chǎn)品質(zhì)量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多對蝦白斑病毒等動物疫病PCR檢測試劑盒產(chǎn)品請聯(lián)系我司咨詢訂購。...

特別提示：包括對蝦白斑病毒(WSSV)單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：對蝦白斑病毒(WSSV)單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號：SYA513
產(chǎn)品規(guī)格：48次/盒

本試劑盒適合于檢測對蝦樣品按不同的大小或感染期取不同組織樣品等樣本中的對蝦白斑病毒(WSSV)，用于對蝦白斑病毒(WSSV)感染的輔助診斷，其檢測結(jié)果僅供參考。

本試劑盒用一對對蝦白斑病毒特異性引物，結(jié)合一條特異性探針，用熒光PCR技術(shù)對對蝦白斑病毒DNA進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測，用于臨床上對可疑感染動物的病原學(xué)診斷。

試劑盒組成：

組份	數(shù)量	規(guī)格
WSSV反應(yīng)液(WSSV-qPCR MIX)	1管	672μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction)	2管	1.5mL/管
酶混合物(Enzymes MIX)	1管	48μL/管
陰性對照(NTC)	1管	50μL/管
WSSV陽性對照(WSSV-PTC)	1管	50μL/管

儲存條件：-20℃，有效期6個月。

使用方法：

一、樣品采集及前處理：
對蝦樣品按不同的大小或感染期取不同組織樣品0.1g左右，其中，對蝦幼體、仔蝦取完整個體，3cm以下的幼蝦取摘除蝦眼的頭胸部，較大的幼蝦可取腮區(qū)或數(shù)根腮絲，成蝦取1-2根腮絲或自心臟或腹部血竇抽取血淋巴，懷疑為慢性感染的較大幼蝦或成蝦取淋巴器官。如果2h以后才能處理，宜將樣本保存于無水乙醇中。非對蝦的甲殼類動物參照對蝦的方法取樣。非生物樣品，取0.1-0.5g。

手術(shù)剪剪碎混勻后取0.05g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至1.5mL滅菌離心管中，8000rpm離心2min，取上清液100μL于1.5mL滅菌離心管中。

二、DNA提取：
可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液，按以下說明進(jìn)行DNA核酸的粗提。也可采購北京百奧萊博科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)，并按照相應(yīng)試劑盒說明進(jìn)行操作。
對上述處理好的樣本加入等體積核酸提取液(固體標(biāo)本加入50μL核酸提取液)，100℃恒溫處理10min，13000rpm離心5min，取上清液轉(zhuǎn)移至新的1.5mL EP管，-20℃保存；
 注：陽性對照和陰性對照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽性對照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽性對照。

三、檢測步驟：
1．試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(WSSV-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑	每個反應(yīng)加入的量	N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液	14μL	N×14μL
酶混合液	1μL	N×1μL
總量	15μL	N×15μL

計算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(WSSV-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
2．qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入實時熒光PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。推薦循環(huán)條件：

	1循環(huán)	50℃ for 2 min
預(yù)變性	1循環(huán)	95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增	40循環(huán)	95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec

在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

四、結(jié)果分析：
1．結(jié)果分析條件設(shè)定
直接讀取檢測結(jié)果。基線和閾值設(shè)定原則根據(jù)儀器噪聲情況進(jìn)行調(diào)整，以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴(kuò)增曲線的zuì高點為準(zhǔn)。
2．試驗成立判定
?陰性對照(NTC)：不應(yīng)產(chǎn)生任何的擴(kuò)增曲線。
?陽性對照(WSSV-PTC)：均產(chǎn)生擴(kuò)增曲線。
?以上條件應(yīng)同時滿足，否則，此次試驗視為無效。
3．結(jié)果判定
?在試驗成立的條件下，Ct值≤35，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線，表明WSSV核酸陽性。
?Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本，表明WSSV核酸陰性。
?如果Ct值＞35，判為可疑樣品。對于可疑樣品，先看擴(kuò)增曲線。如果擴(kuò)增曲線為對數(shù)擴(kuò)增曲線，則為可疑陽性，否則判為陰性。
?對于可疑陽性樣品，重新抽提核酸，再次進(jìn)行WSSV 檢測。如果重復(fù)擴(kuò)增曲線為對數(shù)擴(kuò)增曲線，判為樣本陽性，表明WSSV核酸陽性；否則判為樣本陰性。

五、注意事項：
?初次使用前請仔細(xì)閱讀說明書。并嚴(yán)格按照說明書步驟操作。
?所有使用的離心管zuì好高壓滅菌，而且必須不含DNA酶。
?PCR操作應(yīng)嚴(yán)格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)等)，防止實驗室污染。
?樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺進(jìn)行，以免污染。
?試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待，并按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通則》進(jìn)行處理。

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名稱：禽流感病毒(AIV-M)通用型單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒（定性/定量）
貨號：SYA320
規(guī)格：48次/盒|96次/盒
一、簡介：
禽流感病毒實時熒光qRT-PCR檢測試劑是按照美國農(nóng)業(yè)部(USDA)的檢測標(biāo)準(zhǔn)和我國《禽流感病毒通用熒光RT-PCR檢測方法》(GB/T 19438.1-2004)而制備的商業(yè)化檢測試劑盒。本試劑盒為中的探針報告基團(tuán)為6-FAM，淬滅基團(tuán)為MGB。本方法可定性檢測所有亞型禽流感病毒。

二、用途：
本試劑盒適用于檢測各種禽類喉咽棉拭子、泄殖腔棉拭子、各種組織樣品、尿囊液及細(xì)胞培養(yǎng)液等。可用于禽流感病毒感染的輔助診斷、監(jiān)測及流行病學(xué)調(diào)查，其檢測結(jié)果僅供參考。

三、試劑盒組成：(48T)
組份 數(shù)量 規(guī)格
熒光qRT-PCR反應(yīng)液(AIV-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
無核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
陰性對照(NTC) 1 管 50μL/管
陽性對照(AIV-PTC) 1 管 50μL/管

四、儲存條件及有效期：
本試劑盒于-18℃以下保存，有效期為6個月。

五、熒光PCR儀器適用范圍：
ABI系列，Roche系列等熒光定量PCR檢測儀等。

六、樣品的采集與RNA提取
6.1 樣品的采集
按照標(biāo)準(zhǔn)《高致病性禽流感診斷技術(shù)》(GB/T 18936-2003 )和《禽流感病毒通用熒光RT-PCR檢測方法》(GB/T 19438.1-2004 )進(jìn)行樣品的采集。
6.2 樣品RNA提取
可按常規(guī)方法提取，也可采用商品化試劑盒提取病毒RNA。
（1） 取滅菌的1.5 mL Eppendorf離心管，做好標(biāo)識。
（2） 每管加入600 μL裂解液，分別加入被檢樣本200 μL，再加入200 μL氯fǎng，混勻器上振蕩混勻5 s，于4℃ 12000 r 離心15 min。
（3） 取無RNA酶的1.5 mL Eppendorf離心管，加入-20℃預(yù)冷400μL異丙醇，吸取步驟(2)各管中的上清液轉(zhuǎn)移至相應(yīng)的管中，避免吸出中間層，顛倒混勻。
（4） 于4℃ 12000 r離心15 min，棄上清，倒置于吸水紙上，沾干液體；加入600μL 75％預(yù)冷乙醇，洗滌。
（5） 于4℃ 12000 r離心10 min，棄上清，倒置于吸水紙上，沾干液體。
（6） 10000 r離心10 s，用微量加樣器將其吸干，室溫干燥5 min～10 min。
（7） 加入10μL 無核酸降解酶的水，溶解管底的RNA，5000 r離心5 s，冰上保存?zhèn)溆谩Ｈ粜栝L期保存須放置-70℃ 冰箱。
 注：陽性對照和陰性對照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽性對照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽性對照。

七、檢測步驟：
7.1 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光qRT-PCR反應(yīng)液(AIV-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
計算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000r離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(AIV-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 real time RT-PCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
反轉(zhuǎn)錄(Reverse Transcription) 1循環(huán) 45℃ for 5 min
預(yù)變性 1循環(huán) 94℃ for 30 sec
PCR擴(kuò)增(PCR amplification ) 40循環(huán) 94℃ for 5 sec
60℃ for 30 sec
在60℃延伸時收集熒光信號 。報告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。

八、結(jié)果分析：
8.1 結(jié)果分析條件設(shè)定
直接讀取檢測結(jié)果。基線和閾值設(shè)定原則根據(jù)儀器噪聲情況進(jìn)行調(diào)整，以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴(kuò)增曲線的zuì高點為準(zhǔn)。
8.2 試驗成立判定
（1） 陰性對照(NTC)：不應(yīng)產(chǎn)生任何的擴(kuò)增曲線。
（2） 陽性對照(AIV -PTC)：均產(chǎn)生擴(kuò)增曲線。
（3） 以上條件應(yīng)同時滿足 ，否則，此次試驗視為無效。
8.3 結(jié)果判定
（1） 在試驗成立的條件下，Ct值≤35的樣本為陽性，表明AIV核酸陽性。
（2） Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本，表明AIV核酸陰性。
（3） 如果35＜Ct值≤40，判為可疑樣品。對于可疑樣品，先看擴(kuò)增曲線。如果擴(kuò)增曲線為對數(shù)擴(kuò)增曲線，則為可疑陽性，否則判為陰性。
（4） 對于可疑陽性樣品，重新抽提核酸，再次進(jìn)行AIV qRT-PCR檢測。如果重復(fù)擴(kuò)增曲線為對數(shù)擴(kuò)增曲線，判為樣本陽性，表明AIV核酸陽性；否則判為樣本陰性。

九、注意事項：
（1） 初次使用前請仔細(xì)閱讀說明書。并嚴(yán)格按照說明書步驟操作。
（2） 所有使用的離心管zuì好高壓滅菌，而且必須不含RNA酶。
（3） PCR操作應(yīng)嚴(yán)格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)等)，防止實驗室污染。
（4） 樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺進(jìn)行，以免污染。
（5） 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待，并按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通則》進(jìn)行處理。


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貨號	名稱	規(guī)格
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