BTN101112 柱式水樣DNA提取試劑盒
- 產(chǎn)品/服務(wù)：BTN101112 柱式水樣DNA提取試劑盒
- 型 號(hào)：BTN101112
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價(jià)：面議
- 更新日期：2023-05-31
- 有效期至：長(zhǎng)期有效
- 瀏覽次數(shù)：958
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
柱式水樣DNA提取試劑盒的品牌是百奧萊博，是優(yōu)質(zhì)的DNA提取純化產(chǎn)品，本制品僅用于生物化學(xué)研究方面，我公司專注于DNA提取純化產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和供應(yīng)，為您提供的柱式水樣DNA提取試劑盒質(zhì)量可靠，批間差小，且價(jià)格公道，熱切盼望您選購(gòu)我們的產(chǎn)品。...
產(chǎn)品詳細(xì)介紹
特別提示：包括柱式水樣DNA提取試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產(chǎn)品名稱：柱式水樣DNA提取試劑盒
英文名稱：Liquid sample DNA column extraction kit
產(chǎn)品貨號(hào)：BTN101112
產(chǎn)品規(guī)格：50次
根據(jù)您的關(guān)注的柱式水樣DNA提取試劑盒，您可能還對(duì)以下產(chǎn)品有需求：
名稱：柱式動(dòng)物線粒體DNA提取試劑盒(測(cè)序級(jí))
貨號(hào)：BTN120501
規(guī)格：15次
本試劑盒就是基于先純化動(dòng)物細(xì)胞線粒體、再?gòu)闹兄椒兓銬NA的兩步法試劑盒。
試劑盒特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶不需要自己配制各種溶液，優(yōu)化各種條件。
2. 兩步法，先純化線粒體，再柱式法純化其中的DNA，有粗提(mtDNA純化前不用DNase處理線粒體)和精提(mtDNA純化前用DNase處理線粒體)兩套操作方案，適合于各種要求不同的后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
3. 本產(chǎn)品一次可以處理約107×108個(gè)培養(yǎng)細(xì)胞，10mg培養(yǎng)細(xì)胞(相當(dāng)于5瓶150 mm培養(yǎng)細(xì)胞)可以純化到到0.2-0.5mg線粒體。
4. 本產(chǎn)品適用于各種動(dòng)物懸浮培養(yǎng)細(xì)胞和貼壁培養(yǎng)細(xì)胞，不建議用于動(dòng)物實(shí)體組織。
5. 提供線粒體染液，可以在操作中隨時(shí)監(jiān)測(cè)純化過程中線粒體的完整性。
試劑盒組成：
| 成分 | 規(guī)格 | 備注 |
| 溶液A | 225ml | 配制勻漿液 |
| 蔗糖 | 25.4g | 配制勻漿液 |
| 詹納斯染色液 | 1ml | 染色線粒體 |
| 溶液B | 0.5ml | 配制核酸酶反應(yīng)液 |
| DNase A干粉 | 1mg | 酶切細(xì)胞核DNA |
|
Benzo | 100μl | 酶切細(xì)胞核DNA |
| 溶液C | 10ml | 純化mtDNA |
| 溶液D | 5ml | 純化mtDNA |
| 溶液E | 20ml | 純化mtDNA |
| 離心吸附柱 | 15套 | 純化mtDNA |
| 通用洗柱液 | 15ml | 純化mtDNA |
| DNA洗脫液 | 10ml | 純化mtDNA |
| 人TPMT VNTR | 上游引物 | GCT CCG CCC TGC CCA TTT |
| 下游引物 | GCC TCC GCC ACC AAT GAC | |
| 人線粒體HV2區(qū) | 上游引物 | GGT CTA TCA CCC TAT TAA CCA C |
| 下游引物 | CTG TTA AAA GTG CAT ACC GCC A | |
| 說明書 | 1份 | |
儲(chǔ)存條件：常溫運(yùn)輸和保存，保存期限一年。
使用方法：
注意：線粒體膜對(duì)溫度高度敏感，所以整個(gè)操作必須在冰上或冷室進(jìn)行，所要用到的溶液和離心管都必須預(yù)先冷卻，否則線粒體容易破裂。
一：線粒體粗提
1. 稱25.4g蔗糖到225mL溶液A中，蓋上蓋子后充分搖晃3～5分鐘溶解即得250mL溶液A工作液，放冰上預(yù)冷待用。未用完的溶液A工作液需要-20℃保存，否則會(huì)長(zhǎng)菌。
2. 如果是單層細(xì)胞，先用20mL PBS緩沖液洗滌107×108個(gè)培養(yǎng)的單層細(xì)胞，共洗滌2次。然后用塑料刮匙刮下細(xì)胞，重懸在20mL PBS緩沖液中。如果是懸浮細(xì)胞，則1000g 4℃離心10分鐘收集107×108個(gè)細(xì)胞，再用20mL PBS緩沖液洗滌2次，zuì后將細(xì)胞重懸在20mL PBS緩沖液中。
3. 用平甩轉(zhuǎn)子(swinging-bucket rotor)離心機(jī)1000 g 4℃離心10分鐘，吸棄上清，保留細(xì)胞沉淀。
4. 加入5倍體積(以細(xì)胞沉淀的體積為基數(shù))的溶液A工作液，輕柔重懸細(xì)胞。
5. 如果是成纖維細(xì)胞，由于其難于裂解，可將細(xì)胞重懸液在-80℃放置20-30分鐘后再化凍，然后進(jìn)入下步操作。如果不是，則直接進(jìn)入下步操作。
6. 將細(xì)胞重懸液體轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的Dounce玻璃勻漿器中(工作體積為10-15mL，間隙為0.12 mm，zuì好是玻璃材質(zhì)，否則線粒體產(chǎn)率會(huì)降低)勻漿適當(dāng)次數(shù)。細(xì)胞株不同，其zuì適勻漿次數(shù)不同，一般需要40次-60次左右。勻漿是線粒體純化zuì關(guān)鍵的步驟，故勻漿前zuì好先通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定zuì適勻漿次數(shù)，方法是每勻漿5-10次后，取2-3μl勻漿液到載玻片上，然后在相差顯微鏡下觀察，完整細(xì)胞數(shù)量降低到20-50%以下為佳。
7. 用平甩轉(zhuǎn)子離心機(jī)4℃ 1000 g離心10分鐘。沉淀含殘留完整細(xì)胞、細(xì)胞碎片和細(xì)胞核，上清液含線粒體。
8.轉(zhuǎn)移上清液到離心管中，冰上放置待用。如有必要，可在顯微鏡下檢測(cè)上清液中線粒體的完整性。具體做法是先滴一滴上清液到載玻片上，再滴入50μl詹納斯染液染色20分鐘，油鏡下觀察，藍(lán)綠色顆粒狀物即為線粒體。
9. 用固定角度轉(zhuǎn)子(fixed-angle rotor)離心機(jī)4℃ 10000 g離心10分鐘，棄上清，所得棕黑色沉淀即為粗提線粒體沉淀。
10. 用5mL溶液A工作液洗滌2次得線粒體粗提液(即重懸后，4℃ 10000 g離心10分鐘，棄上清)。
11. 如果后續(xù)實(shí)驗(yàn)是提取mtDNA用于PCR或Southern雜交，則直接進(jìn)入第3部分mtDNA提取，也可以放-80℃長(zhǎng)期保存待用。
12. 如果后續(xù)實(shí)驗(yàn)是提取mtDNA用于高通量測(cè)序，則必須徹底降解掉其中的細(xì)胞核DNA污染。勻漿過程中一個(gè)破裂的細(xì)胞核釋放出的DNA相當(dāng)于上百萬個(gè)線粒體的DNA量之合，所以無論如何小心，粗提線粒體中必有大量的細(xì)胞核DNA污染，如果不將其清除，高通量測(cè)得的序列將大部分來于核DNA而非mtDNA。
二：線粒體粗提液中細(xì)胞核DNA的去除及鑒定
13. 將線粒體重懸于0.3mL溶液A工作液中，取10μl作為未處理對(duì)照。
14. 加入6μl Benzo
15. 37℃保溫一段時(shí)間酶切細(xì)胞核DNA。注意：zuì好先預(yù)實(shí)驗(yàn)，每隔一段時(shí)間取10μl樣品，滅活其中的DNase后作為模板用PCR擴(kuò)增1-4個(gè)自選的VNTR位點(diǎn)和1-2個(gè)mtDNA基因(如vis或COII基因)，檢測(cè)不到VNTR基因而能檢測(cè)到mtDNA基因的處理時(shí)間為zuì佳。可從本公司另購(gòu)細(xì)胞核基因和線粒體基因?qū)Ｒ恍砸铩?br /> 16. 加入10μl自備的0.5M EDTA溶液(pH8.0)以終止酶反應(yīng)。顯微鏡下檢查線粒體完整性(見上節(jié)第8步)。
17. 用固定角度轉(zhuǎn)子離心機(jī)4℃10000 g離心10分鐘，棄上清。
18. 用1mL的溶液A工作液洗滌沉淀(即重懸后，4℃ 10000 g離心10分鐘，棄上清。此為一次洗滌。)2次得到線粒體沉淀。
三：線粒體DNA提取
19.在不超過100μl的線粒體沉淀中加入600μl預(yù)熱的溶液C到沉淀中，充分吹打均勻。
20. 再加入150μl(可稱150-160mg)預(yù)熱的溶液D到離心管中，顛倒數(shù)次混勻。此時(shí)溶液中可能有白色絲狀懸浮物產(chǎn)生。
21. 65℃放置3～5分鐘。
22. 加入200μl自備lǜ仿，震蕩混勻10-30秒，此時(shí)溶液將呈乳白色。
23. 12000～15000g室溫離心2分鐘。此時(shí)上清液將變得透明，中間層有白膜。小心轉(zhuǎn)移上清液到一個(gè)新的1.5mL塑料離心管中，避免觸及中間的白膜。
24. 加入1.5倍體積的溶液E，顛倒混勻后全部轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，室溫放置至少2分鐘。
25. 12000rpm室溫離心1分鐘，棄收集管中的穿透液。
26. 通用洗柱液洗滌2次(將0.5mL加入離心柱中，12000rpm室溫離心1分鐘，棄穿透液，此為洗滌一次，再重復(fù)一次)。
27. 空甩半分鐘去除殘留液體,將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到新的1.5mL離心管中。
28. 加30-50μl DNA 洗脫液，室溫放置3～5分鐘。
29. 12000rpm室溫離心1分鐘即得純化的mtDNA溶液。
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