KFS162 羅丹明 123
- 產品/服務：KFS162 羅丹明 123
- 型 號：KFS162
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-05-31
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：1015
產品簡介
羅丹明 123是高品質的探針標記及檢測產品，由北京百奧萊博供應，本產品僅用于生物化學研究方面，本產品質量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多羅丹明 123等探針標記及檢測產品請聯系我司咨詢訂購。...
產品詳細介紹
特別提示：包括羅丹明 123在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
產品名稱：羅丹明 123
英文名稱：Rhodamine 123
產品貨號：KFS162
產品規格：5mg
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貨號：BTN90603A
規格：5次
本試劑盒是基于Feinberg和Vogelstein發明的隨機引物標記法而開發出來的即用型DNA探針標記試劑盒，標記過程由雙鏈DNA熱變性、隨機引物與單鏈DNA結合、在Klenow DNA聚合酶催化下，引物的延伸合成DNA探針并摻入標記的核苷酸三步組成，可用下面的示意圖表示：
本產品對Feinberg和Vogelstein經典方法進行了改良。
產品特點：
1. 提供的標記反應液整合了除酶和模板外的所有成分，簡化了反應加樣步驟，提高了標記反應的可重復性。
2. 使用無外切活性的Klenow exo- DNA聚合酶，已標記DNA探針不會被酶降解。
3.快速，zuì快1小時即可完成標記反應。
4. 得到的DNA探針比活性高(如果是同位素，可以達到109cpm/μg DNA)，檢測靈敏度高。
5. 所需模版DNA量少(只需要10ng以上即可)，DNA可以是各種形狀(線狀和環狀)的、也可以是單鏈或雙鏈的，長度在100bp以上均可。
6. 得到的探針長度在200-400nt之間，可以用于Southern雜交、Northern雜交、原位雜交、菌落和斑點印跡雜交等。
7. 提供三種標記選擇，其中BTN90603A可用于各種同位素標記和其他任何非同位素標記，但需自備標記底物；BTN90603B和BTN90603C可分別用于生物素和地高xīn標記，不需自備標記底物。
試劑盒組成：
| 成分 | 規格 |
| 2×A型標記反應液(自備標記物型) | 50μl(僅A型有) |
| 2×B型標記反應液(生物素型) | 50μl(僅B型有) |
| 2×C型標記反應液(DIG型) | 50μl(僅C型有) |
| dATP,2mM | 10μL(僅A型有) |
| dTTP,2mM | 10μL(僅A型有) |
| dGTP,2mM | 10μL(僅A型有) |
| dCTP,2mM | 10μL(僅A型有) |
| Klenow exo-聚合酶(2U/μL) | 5μl |
| 超純水 | 1ml |
| 說明書 | 1份 |
儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。
使用方法：
1.在一干凈的硅化的塑料離心管中加入下列成分：
| 成分 | 用量 |
| 模板DNA | 50-150ng |
| 2×標記反應液(ABC三種之一) | 10μl |
| 超純水 | 補水到15μl |
注意：非同位素標記物由于疏水性強，容易與常用的塑料離心管表面非特異性結合，所以一定要使用硅化的塑料離心管。模板DNA并非越多越好，因為模板會在雜交反應中跟標記的探針雜交，競爭性地抑制探針跟靶分子的雜交。
2. 沸水浴5-10分鐘，或在PCR儀上100℃加熱5-10分鐘使DNA模版充分變性，立即放冰上待用。注意：如果PCR儀器不能設置到100℃，99℃加熱5分鐘也可。
3.高速離心數秒使所有液體集中在管底，根據試劑盒類型加入下列成份：
| 試劑盒類型 | 成分及用量 |
| BTN90603A型 |
dATP、dGTP、dCTP各1μl(共3μL，濃度均為2mM) 自備的2mM dTTP/標記dUTP混合物(見注)1μL 1μl Klenow exo聚合酶 |
| BTN90603B型 |
1μl Klenow exo聚合酶 4μl超純水 |
| BTN90603C型 |
1μl Klenow exo聚合酶 4μl超純水 |
注：上表中的dTTP/標記dUTP混合物中dTTP和標記的dUTP的總濃度為2mM(在20μL體系中混合液的終濃度為0.1mM，dTTP與生物素或DIG標記的dUTP的比例zuì好為65:35)。由于空間阻礙，并非標記生物素或DIG標記的dUTP越多靈敏度越高，一般dTTP與標記dUTP的比例在65：35為zuì佳。但如果使用自備的其他標記核苷酸，如fluorescein、hydroxycoumarin、resorufin和aminoallyl標記的dUTP，則用戶需要自己摸索其與dTTP之間的zuì佳比例，如果使用32P標記的dUTP，則比活zuì好為3000Ci/mmol，濃度為好為10uCi/μL，并且不需要加入dTTP。
4. 輕柔吹打混勻。如有液滴沾在管壁上，高速離心數秒使所有液體集中在管底。
5. 37℃保溫1-20小時。標記效率跟模版量和保溫時間相關，具體見下表：
| 模版DNA用量 | 1小時后探針合成量 | 20小時后探針合成量 |
| 10ng | 80ng | 900ng |
| 30ng | 150ng | 1.35μg |
| 100ng | 350ng | 1.65μg |
| 300ng | 750ng | 2.2μg |
| 1μg | 1.3μg | 2.6μg |
| 3μg | 1.6μng | 2.6μg |
6. 加1μl自備的0.5M EDTA(pH8.0)終止反應，立即放冰上待用或放-20℃保存一年。用前需要加熱100℃ 5分鐘使DNA探針變性成單鏈，然后直接加入到雜交反應液中即可。如果電泳檢測，標記產物將是彌散狀態。
注意：本方法標記核苷酸摻入率高，因此可以不經純化直接使用。如果需要純化，注意不要用酚抽提法純化非同位素(生物素、DIG和其他等)標記的DNA探針，因為這些標記分子疏水性強，能使標記的DNA進入疏水的有機相而丟失，但可以用乙醇沉淀和Sephadex G50回收(可另購非同位素探針柱式純化試劑盒)。對比活高的同位素探針，由于其其不穩定，因此應該立即使用，不要長久放置。
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