增強型無內毒素質粒大提試劑盒是高品質的DNA提取純化產品，由北京百奧萊博供應，本產品用于科學研究，我公司專注于DNA提取純化產品的研發、生產和供應，為您提供的增強型無內毒素質粒大提試劑盒質量可靠，批間差小，且價格公道，熱切盼望您選購我們的產品。...

特別提示：包括增強型無內毒素質粒大提試劑盒在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：增強型無內毒素質粒大提試劑盒
英文名稱：Enhanced Endotoxin-free Plasmid Mass Extraction Kit
產品貨號：WH0029
產品規格：10次

本試劑盒采用獨特的硅膠膜吸附技術，專一地結合質粒DNA。同時采用特殊的去內毒素溶液ER和過濾器CS1，可有效的去除內毒素、蛋白等雜質；整個提取過程僅需1h，方便快捷。使用本試劑盒提取的質粒DNA可適用于各種常規操作，包括酶切、PCR、測序、連接、轉化和轉染多種細胞等實驗。推薦每次菌液使用量：高拷貝質粒推薦使用量為100ml，得率一般在500-1500μg左右；低拷貝質粒推薦使用量為200 ml，得率一般在50-300 μg左右。

產品特點：
·高純度：采用獨特的內毒素沉淀技術，特異的去除內毒素。
·操作簡便：采用吸附柱技術特異吸附質粒，操作更為簡便。
·轉染：適合包括內毒素敏感細胞在內的大多數細胞的轉染。
·應用廣泛：動植物細胞轉染、分子生物學實驗均可應用。

試劑盒組成：

組分	10T
平衡液BL	30ml
溶液P1	125ml
溶液P2	125ml
溶液P4	125ml
去內毒素溶液ER	32ml
緩沖液ED	220ml
漂洗液PW	50ml
洗脫緩沖液TB	30ml
RNase A（10mg/ml)	1.25ml
過濾器CS1	10個
吸附柱CP6	10個
收集管（50ml)	20個

保存條件：室溫（15-25℃)干燥條件下，可保存12個月，更長時間的保存可置于2-8℃。2-8℃保存條件下，若溶液產生沉淀，使用前應將試劑盒內的溶液在室溫放置一段時間，必要時可在37℃水浴中預熱10min，以溶解沉淀。次使用前將RNase A加入溶液P1中，混勻后置于2-8℃保存，可穩定保存12個月以上。單獨包裝的RNase A在室溫可穩定保存12個月以上。

注意事項：（請務必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項)
1．溶液P1在使用前先加入RNase A（將試劑盒中提供的RNase A全部加入），混勻，置于2-8℃保存。
2．使用前先檢查平衡液BL、溶液P2和P4是否出現結晶或者沉淀，如有結晶或者沉淀現象，可在37℃水浴中加熱幾分鐘，即可恢復澄清。
3．注意不要直接接觸溶液P2和P4，使用后應立即蓋緊蓋子。
4．使用過濾器時請將推柄小心緩慢地從過濾管中抽出，避免濾膜因壓力而松動。
5．提取的質粒量與細菌培養濃度、質?？截悢档纫蛩赜嘘P。如果所提質粒為低拷貝質粒或大于10 kb的大質粒，應加大菌體使用量，同時按比例增加溶液P1、P2、P4的用量；洗脫緩沖液TB推薦在65-70℃水浴中預熱。可以適當延長吸附和洗脫時間，以提高提取效率。
6．實驗前使用平衡液BL處理吸附柱，可以zuì大限度激活硅基質膜，提高得率。
7．用平衡液處理過的柱子zuì好立即使用，放置時間過長會影響使用效果。

使用方法：
使用前請先在漂洗液PW中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標簽。

1．柱平衡步驟：向吸附柱CP6中（吸附柱放入50 ml收集管中）加入2.5 ml的平衡液BL，8000rpm （~8228×g)離心2 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。（用平衡液處理過的柱子zuì好立即使用）。
2．取100ml （根據培養菌體的濃度選擇合適的量，低拷貝推薦用200 ml）過夜培養的菌液加入離心管，室溫8000rpm （~8228×g)離心3 min收集細菌，盡量吸除上清。
  注意：菌液較多時可以通過幾次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中,菌液量以能夠充分裂解為佳，菌液過多會導致裂解不充分從而降低質粒的提取效率。如果所提質粒為低拷貝質?；虼笥?0 kb的大質粒，應加大菌體使用量，同時按比例增加溶液P1、P2、P4的用量。
3．盡量吸除上清，為確保上清液全部吸取，請用干凈的吸水紙吸去瓶壁上的水滴。
4．向留有菌體沉淀的離心管中加入10 ml溶液P1（請先檢查是否已加入RNase A），使用移液器或渦旋振蕩器徹底懸浮細菌細胞沉淀。
  注意：請務必徹底懸浮細菌沉淀，如果有未徹底混勻的菌塊，會影響裂解效果，導致提取量和純度偏低。對于低拷貝質粒，加大菌體用量的同時按比例增加P1、P2、P4的用量。
5．向離心管中加入10 ml溶液P2，立即溫和地上下翻轉6-8次，使菌體充分裂解，室溫放置5min。
  注意：溫和地混勻，不要劇烈震蕩，以免污染基因組DNA。此時菌液應變得清亮粘稠，如果未變得清亮，可能由于菌體過多，裂解不徹底，應減少菌體量。
6．向離心管中加入10 ml溶液P4，立即溫和地上下翻轉6-8次，充分混勻，至溶液出現白色分散絮狀沉淀。然后室溫放置10min左右。8000rpm （~8228×g)離心5-10min，使白色沉淀離至管底（可適當增加離心時間），將全部溶液小心倒入過濾器CS1中（請避免倒入大量沉淀而阻塞過濾器），慢慢推動推柄過濾，濾液收集在干凈的50 ml的管中（自備）。
  注意：加入溶液P4后應立即混勻，避免產生局部沉淀。如果離心后倒入過濾器CS1中的溶液有白色沉淀也不會影響過濾。如果菌體過多（>100ml），推薦延長離心時間至20-30 min。
7．加入3 ml紅色的去內毒素溶液ER，顛倒混勻后溶液呈現出均勻透明的黃色。可選步驟：如果需要達到更低的內毒素水平，可以將混勻后的上述溶液冰浴20 min后，42℃水浴5 min，5000rpm離心3 min，將上清轉移到一個全新的50 ml離心管中。
8．對于高拷貝質粒加入0.3倍上述濾液體積的異丙醇，對于低拷貝質粒加入0.2倍上述濾液體積的異丙醇（加入異丙醇過多容易導致RNA污染)，上下顛倒混勻后轉移到吸附柱CP6中（吸附柱放入50 ml收集管中)。
  注意：吸附柱CP6的zuì大容積為15 ml，所以需要分2次過柱。個別情況下離心機轉子傾角較大，此時，建議加入吸附柱CP6的溶液體積不超過10 ml，以防產生漏液現象。
9．室溫8000rpm （~8228×g)離心2 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CP6重新放回收集管中。
  注意：將第8步中所得溶液分2次過柱，每次均按以上條件操作。
10．向吸附柱CP6中加入10 ml緩沖液ED，8000rpm （~8228×g)離心2 min，棄掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
11．對于低拷貝質粒，重復操作步驟10一次。
12．向吸附柱CP6中加入10 ml漂洗液PW （請先檢查是否已加入無水乙醇)，8000rpm（~8228×g)離心2 min，棄掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
13．重復操作步驟12一次。
14．將吸附柱CP6重新放回收集管中，8000rpm （~8228×g)離心5 min，然后將吸附柱CP6開蓋，置于室溫放置數分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。
  注意：漂洗液中乙醇的殘留會影響后續的酶促反應（酶切、PCR等)實驗。
15．將吸附柱CP6置于一個干凈的50 ml收集管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加1-2 ml洗脫緩沖液TB，室溫放置5 min，然后室溫8000rpm （~8228×g)離心5 min。將50 ml離心管中的洗脫液全部移入一個干凈的1.5 ml離心管，-20℃保存。
  注意：為了增加質粒的回收效率，可將得到的溶液重新加入到吸附柱中，重復步驟13。洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用ddH2O做洗脫液應保證其pH值在7.5-8.0范圍內，pH值低于7.0會降低洗脫效率。洗脫緩沖液用量的多少主要是依據質粒的拷貝數以及實驗所需要的濃度來確定。洗脫緩沖液體積不少于1 ml，體積過小影響回收效率。DNA產物應保存在-20℃，以防DNA降解。

質粒DNA濃度及純度檢測：
得到的質粒DNA可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。OD₂₆₀值為1相當于大約50 μg/ml雙鏈DNA。純化的質粒DNA OD₂₆₀/OD₂₈₀通常在1.8-2.0左右，可直接應用于細胞轉染甚至動物體內實驗等對DNA純度要求很高的實驗中。

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名稱：非酶RNA清除劑1.0
貨號：BTN51203
規格：1.5mL
本品為非酶法質粒RNA和蛋白質污染的去除試劑，專用于從堿變性法純化的質粒中去除其中的大部分RNA污染和大部分蛋白質污染。

產品特點：
1.，能去除質粒粗提物中80%左右的RNA污染和60%的蛋白污染。而常用的RNase或LiCl處理只能去除RNA，不能去除蛋白質污染。
2.快速，整個過程只需要十余分鐘，不需要37℃保溫。
3. 經過本產品處理過的樣品，由于沒有RNA和蛋白質的干擾，使用硅膠膜或其他吸附離心法吸附、回收質粒DNA的效率比沒處理過的樣品更高。
4. 價格不到RNase A的1/2，在質粒的大規模制備時成本更加明顯。
5. 制備臨床用(如基因治療)的質粒DNA時，可以減少后期在臨床報批、生產、質檢和使用中的很多麻煩(使用生物來源的RNase A和蛋白酶時，容易帶入對人體有害的內毒素、LPS等污染物)。

儲存條件：常溫運輸和保存，有效期一年。

使用方法：

一、從堿變性澄清液中去除RNA和蛋白質
1. 將約1/5體積的RNA Scavenger加入到堿變性澄清液中(加溶液III后離心得到的上清液一般是450μl，所以需要加入50μl)。
2. 混勻后室溫放置10分鐘。
3.室溫8000g離心10分鐘。
4.轉移上清到一新的離心管中，后續處理跟經典的方法一樣(即加入等體積的異丙醇或兩倍體積的乙醇,混勻后室溫離心10分鐘,棄上清液后用1mL 75%乙醇洗一次,短暫離心，去掉殘留液體,加入適量TE緩沖液溶解質粒待用)。

二、從質粒粗提液中去除RNA和蛋白質
1、將1/4體積的RNA Scavenger-1直接加入到已經溶解在TE或其他溶解液的質粒DNA中。
2、混勻后室溫放置10分鐘。
3、室溫8000g離心10分鐘。
4、轉移上清到一新的離心管中，加入等體積的異丙醇或兩倍體積的乙醇。
5、混勻后室溫離心10分鐘。
6、棄上清液后用1mL 75%乙醇洗一次。
7、短暫離心，去掉殘留液體。
8、加入適量TE緩沖液溶解質粒待用。

使用效果：

圖注：用經典的堿變性法從1.5mL E.coli過夜培養液中提取的pGEM-3質粒粗提物(加溶液ⅡI離心上清)經過RNA Scavenger處理后(LA+RNA Scavenger)與未經處理的樣品(AL)電泳比較。上樣量為1/5。

圖注：用經典的堿變性法提取的pGEM-3質粒DNA溶于TE中后，經過RNA Scavenger處理的(+)與未經處理的(-)樣品進行電泳比較。處理過的樣品失去80%左右的RNA。

疑難解答：
Q：電泳檢測質粒DNA時也需要將其RNA污染去掉嗎?
A：是。否則RNA 將結合大部分的EB溶液,使質粒DNA的帶型減弱。
Q：RNA Scavenger-1跟RNA Scavenger-2 有何區別？
A：
1. RNA Scavenger-2處理過的樣品不再需要醇/鹽沉淀處理，而RNAScavenger-1處理的樣品還需要醇/鹽沉淀去除RNA Scavenger-1；
2. RNA Scavenger-2與柱式硅膠膜純化方法兼容，而RNA Scavenger-1 不兼容；
3. RNA Scavenger-2 不但可以用于去除質粒DNA的RNA污染，還可以用于去除基因DNA的RNA污染，而RNA Scavenger-1只能用于質粒DNA樣品。

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貨號	名稱	規格
BTN90901	菌體內毒素清除劑	200mL
BTN101112	柱式水樣DNA提取試劑盒	50次
ALH156	酵母基因組DNA大量提取試劑盒	10次
ALH158	細胞凋亡DNA Ladder抽提試劑盒(分離基因組DNA)	20次|50次
ALH160	hoeschst凋亡小體染色試劑盒	100次
ALH172	病毒DNA提取試劑盒	50次
ALH174	口腔拭子基因組DNA提取試劑盒	50次

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