快捷型總RNA提取試劑盒由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品用于科研目的，我公司的快捷型總RNA提取試劑盒品質(zhì)上佳，經(jīng)過多年的開發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...

特別提示：包括快捷型總RNA提取試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：快捷型總RNA提取試劑盒
英文名稱：Total RNA Extraction Kit
產(chǎn)品貨號：WH0063
產(chǎn)品規(guī)格：50次

本試劑盒是一種以異硫氰酸胍/酚為基礎(chǔ)的RNA提取方法。獨特配方的裂解液RZ能快速有效去除細(xì)胞中基因組DNA和蛋白質(zhì)，使獲得的RNA純度高，穩(wěn)定性好。

本試劑盒用于從血液、動物細(xì)胞、組織、植物組織中分離總RNA，每個離心柱每次可處理50-100mg組織或5×10⁶細(xì)胞，可同時處理大量不同樣品。一個小時內(nèi)即可完成反應(yīng)，提取的總RNA得率更高，純度更好，沒有DNA和蛋白的污染，可用于多種下游實驗。

產(chǎn)品特點：
· RNA純度更高，無雜質(zhì)殘留，特別適合于對純度要求高的下游實驗。
·應(yīng)用廣泛，可提取多種不同實驗樣本。
·操作簡單，可在一小時內(nèi)完成實驗。

下游應(yīng)用：
· RT-PCR。
· Northern Blot、Dot Blot。
· Real-Time PCR。
· polyA篩選、體外翻譯、RNase保護(hù)分析和分子克隆。

試劑盒組成：

組分	50T
裂解液RZ	60ml
去蛋白液RD	12ml
漂洗液RW	12ml
RNase-Free ddH2O	15ml
RNase-Free吸附柱CR3（含2ml收集管)	50套
RNase-Free離心管（1.5ml)	50個

儲存條件：室溫（15-25℃)保存，裂解液RZ應(yīng)在2-8℃避光保存。

預(yù)防RNase污染，應(yīng)注意以下幾方面：
1．經(jīng)常更換新手套。因為皮膚經(jīng)常帶有細(xì)菌，可能導(dǎo)致RNase污染。
2．使用無RNase的塑料制品和槍頭避免交叉污染。
3．RNA在裂解液RL中時不會被RNase降解。但提取后繼續(xù)處理過程中應(yīng)使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4h，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10min，然后用水徹底清洗，再滅菌，即可去除RNase。
4．配制溶液應(yīng)使用無RNase的水。（將水加入到干凈的玻璃瓶中，加入DEPC至終濃度0.1%（V/V)，放置過夜，高壓滅菌。）

使用前注意事項：
若提取細(xì)菌RNA，推薦應(yīng)用培養(yǎng)細(xì)胞/細(xì)菌總RNA提取試劑盒（目錄號：WH0060）

操作步驟：
次使用前應(yīng)在去蛋白液RD、漂洗液RW中加入無水乙醇，加入量請參見瓶上標(biāo)簽。

1．樣品處理
a．組織：將組織在液氮中磨碎。每50-100mg組織加1ml裂解液RZ，用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過裂解液RZ體積的十分之一。
b．單層培養(yǎng)細(xì)胞：直接在培養(yǎng)板中加入裂解液RZ裂解細(xì)胞，每10cm2面積加1ml RZ。用取樣器抽打若干次至溶液透明。
  注意：裂解液RZ的加入量根據(jù)培養(yǎng)瓶面積決定，不是由細(xì)胞數(shù)決定。如果加量不足，可能導(dǎo)致提取的RNA中有DNA污染。
c．細(xì)胞懸液：離心取細(xì)胞，棄上清。每5-10×10⁶動物細(xì)胞和植物細(xì)胞加入1ml裂解液RZ。加裂解液RZ前不要洗滌細(xì)胞，以免降解mRNA。
d．血液：直接取新鮮血液，加入3倍體積RZ（推薦0.25 ml血液＋0.75 ml RZ），充分振蕩混勻。
2．將勻漿樣品在15-30℃放置5 min，使得核酸蛋白復(fù)合物完全分離。
3．可選步驟：4℃ 12000rpm （~13400×g)離心5 min，取上清，轉(zhuǎn)入一個新的無RNase的離心管中。
  注意：如果樣品中含有較多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物結(jié)節(jié)部分等，可加此步驟離心去除。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜、多糖、高分子量DNA，RNA存在于上清溶液中。
4．加入200μllǜ仿，蓋好管蓋，劇烈振蕩15 sec，室溫放置3 min。
5．4℃ 12000rpm （~13400×g)離心10min，樣品會分成三層：黃色的有機相，中間層和無色的水相，RNA主要在水相中，水相的體積約為所用裂解液RZ試劑的50%。把水相轉(zhuǎn)移到新管中，進(jìn)行下一步操作。
6．緩慢加入0.5倍體積無水乙醇，混勻（此時可能會出現(xiàn)沉淀）。將得到溶液和沉淀一起轉(zhuǎn)入吸附柱CR3中，4℃ 12000rpm （~13400×g)離心30 sec，若一次不能將全部溶液和混合物加入吸附柱CR3，請分兩次轉(zhuǎn)入吸附柱CR3中，4℃ 12000rpm （~13400×g)離心30 sec，棄掉收集管中的廢液。
7．向吸附柱CR3中加入500 μl去蛋白液RD（使用前請先檢查是否已加入乙醇），4℃12000rpm （~13400×g)離心30 sec，棄廢液，將CR3放入收集管中。
8．向吸附柱CR3中加入500 μl漂洗液RW（請先檢查是否已加入乙醇），室溫靜置2 min，4℃ 12000rpm （~13400×g)離心30 sec，棄廢液。
9．重復(fù)操作步驟8
10．將吸附柱放入2 ml收集管中，4℃ 12000rpm （~13400×g)離心2 min，去除殘余液體。
  注意：此步驟目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，離心后將吸附柱CR3在室溫放置片刻，或置于超凈工作臺上通風(fēng)片刻，以充分晾干。如果有漂洗液殘留，可能會影響后續(xù)的RT-PCR等實驗操作。
11．將吸附柱CR3轉(zhuǎn)入一個新的1.5 ml離心管中，加30-100 μl RNase-Free ddH2O，室溫放置2min，4℃ 12000rpm （~13400×g)離心2 min。洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于30 μl，體積過小影響回收效率。且RNA應(yīng)保存在-70℃，以防降解。
  注意：如果想提高RNA得率，可重復(fù)上步操作一次，合并兩次得到的溶液。

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名稱：植物RNA提取試劑盒2.0(無lǜ仿柱式提取)
貨號：BTN160907
規(guī)格：50次
本試劑盒是無酚無lǜ仿柱式植物RNA提取試劑盒(BTN160906)的升級產(chǎn)品。不僅不需要lǜ仿處理，還解決了提取的植物總RNA中出現(xiàn)基因組DNA污染這一難題，提取的RNA通過PCR驗證不含基因組DNA污染。

試劑盒特點：
1. 免酚和lǜ仿處理，操作安全可靠。
2. 簡單快速，處理一個樣品只需要約十分鐘。
3. RNA 純度更高，平均 OD260/280一般都在2.0左右，能夠有效去除大多數(shù)植物中的多糖污染。
4. 目前已測試過上百種植物。
5. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern雜交、cDNA 合成等實驗。
6. 高于進(jìn)口的柱式植物RNA提取產(chǎn)品。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
溶液A	50ml
溶液B	50ml
離心吸附柱	50套
通用洗柱液	100ml
膜反應(yīng)液	2.5ml
RNase-free DNase(1U/μL)	0.5ml
RNA洗脫液	10ml

儲存條件：常溫運輸，4℃保存，DNase低溫運輸保存，有效期一年。

使用方法：
1. 估算組織細(xì)胞的用量。每次微量提取一般需要100-200mg植物葉片、或50-100mg植物種子、或200-500mg植物果實。
2. 先將新鮮植物組織剪切成小塊(保存在RNA保存液中的植物組織需用紙吸去RNA保存液體后再剪切成小塊)，放入10-15mL塑料離心管中，加入1mL溶液A，然后用勻漿器勻漿5-20秒。勻漿時會產(chǎn)生泡沫，但不影響提取效果。也可以使用液氮硯磨法破碎植物組織，硯磨完后加入1mL溶液A。
注意：溶液A在4℃放置后可能會產(chǎn)生沉淀，使用前必須放在65℃水浴使沉淀徹底溶解并充分搖勻后再取用。
3. 將勻漿物或硯磨物轉(zhuǎn)移至干凈的1.5mL塑料離心管中(可以不必轉(zhuǎn)移非液體的細(xì)胞碎片)。有的植物組織(比如果實)含有大量水份，勻漿液會多于1mL，轉(zhuǎn)移時也只取1mL。
4.室溫12000～15000g離心3～5分鐘，管底沉淀為細(xì)胞破碎物。
5. 將上清液(約0.6mL)轉(zhuǎn)移到另一干凈的1.5mL塑料離心管中。
6. 加入等體積的溶液B，充分顛倒混勻。如果有沉淀產(chǎn)生(對某些植物，屬于正常現(xiàn)象)，千萬不要去掉沉淀，一定要把所有的混合物上柱。
7. 將一半的溶液(如果有沉淀，則先混勻)轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，13000-15000g室溫離心半分鐘，棄穿透液。
8. 將剩下的一半溶液(如果有沉淀，則先混勻)轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中，13000-15000g室溫離心半分鐘，棄穿透液。
9. 加0.7mL 通用洗柱液，室溫離心半分鐘，棄穿透液。再加0.3mL 通用洗柱液，室溫離心半分鐘，棄穿透液。一般樣品如此洗滌兩次即可，但如果在第7 步加入溶液B后有沉淀產(chǎn)生，則需要洗三次，每次加入的通用洗滌液的量分別為0.4、0.3和0.3mL。
10. 12000rpm室溫離心10秒以便去除殘留液體。此步很重要，否則殘留的通用洗柱液會抑制后續(xù)反應(yīng)中DNase的活性。
11. 將10μl(10 U)的RNase-free DNase 加入到50μl 37℃預(yù)熱的DNA膜反應(yīng)液中，吹打混勻配制成DNase工作液。
12. 將DNase工作液在37℃預(yù)熱1分鐘，然后全部加入到離心吸附柱中，室溫放置5分鐘。注意：5分鐘一般足夠降解大多數(shù)情況下的DNA污染。如果DNA 沒有徹底降解(可能由于樣品中殘留的雜質(zhì)抑制了DNase的活性)，此步的保溫時間可以適當(dāng)延長到10分鐘或15分鐘。
13. 直接在離心吸附柱中加0.7mL 通用洗柱液，蓋上蓋后顛倒數(shù)次混勻。
14. 12000rpm室溫離心半分鐘，棄穿透液。
15. 再加0.3mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，12000rpm室溫離心半分鐘，棄穿透液。
16. 12000rpm室溫離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的乙醇(通用洗柱液中的成分)會影響RNA的使用。
17. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到RNase-free 收集管中，加入30-50μl RNA洗脫液，室溫放置1-2分鐘。
18. 13000-15000g室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為RNA樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
19. RNA 完整性的電泳檢測：如果需要做Northern雜交，強烈建議用戶使用甲醛變性膠進(jìn)行RNA電泳，因為非變性膠不能分離所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
20. RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測定：將5-10μl RNA 溶于TE緩沖液中(pH7.5-8.2 之間)檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，進(jìn)而計算出RNA的產(chǎn)量(濃度X 體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/組織用量)。
21. RNA 純度測定：無污染的總RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響RT-PCR等反應(yīng)。

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