葡聚糖凝膠G-75由專業試劑供應商北京百奧萊博提供，用于生化實驗研究等領域，我公司專注于分離試劑類產品的研發、生產和供應，為您提供的葡聚糖凝膠G-75質量可靠，批間差小，且價格公道，熱切盼望您選購我們的產品。...

特別提示：包括葡聚糖凝膠G-75在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：葡聚糖凝膠G-75
英文名稱：Sephadex G-75 medium
產品貨號：QN4102
產品規格：25g|100g|500g

葡聚糖凝膠G-75利用分子篩作用，進行多肽分離、脫鹽、清洗生物提取液、分子量測定。

葡聚糖凝膠是一種珠狀的凝膠，含有大量的羥基，很容易在水中和電解質溶液中溶脹。 G型的葡聚糖凝膠有各種不同的交聯度，因此它們的溶脹度和分級分離范圍也有所不同。 葡聚糖凝膠的溶脹度基本上不因鹽和洗滌劑的存在而受影響。

葡聚糖凝膠有不同的粒度。超細級的葡聚糖凝膠是用于需要高分辨率的柱色譜和薄層色譜。粗級和中級的凝膠用于制備性色譜過程，可在較低的壓力下獲得較高的流速。 另外，粗級也可用于批量工藝。

葡聚糖凝膠不溶于一切溶劑(除非它被化學降解)。 它在水、鹽溶液、有機溶劑、堿和弱酸性溶液中都是穩定的，在強酸中凝膠骨架的糖昔鍵被水解。 長期接觸氧化劑將破壞凝膠，因而應避免使用。

葡聚糖疑膠并不熔融，可以在濕態、中性PH進行滅菌或在高壓滅菌器120℃、30分鐘而不影響它的色譜性質。 干態的凝膠加熱至120℃以上將開始焦糖化。 葡聚糖凝膠的機械強度取決于交聯度。

性狀：白色微球，多孔
凝膠類型：凝膠過濾填料，親水型凝膠
結構成分：交聯右旋糖酐
粒徑：40～120μm
工作pH值：pH2～10
操作溫度：4～40℃
球蛋白分離范圍：3000～80000
保存條件：4～25℃

使用方法：
1．葡聚糖凝膠預處理：
在室溫下，將葡聚糖凝膠干粉浸泡于蒸餾水中至少24小時，并不斷攪拌以保證凝膠溶脹，或者用蒸餾水煮沸至少1小時直至充分溶脹，凝膠體積不再變化。
注：在溶脹前，加入蒸餾水攪拌后使其自然沉降，沉降后若上層溶液中漂浮的凝膠碎片顆粒較多，需要重復多次漂洗將其除去，防止層析時阻塞凝膠柱，影響流速。
2．裝柱：
將溶脹好的凝膠根據裝柱要求一次性置入柱內，注意保持濕態裝柱，并避免柱內產生氣泡或斷層；裝柱要均勻，可在凝膠耐受的操作壓下裝柱，裝好的凝膠柱可以檢測柱效，檢測過濾柱裝填是否合格。
凝膠層析分離度取決于柱高，為分離不同組分，凝膠柱床必須有適宜的高度：分級分離時，一般需要100cm左右長的層析柱，柱高與直徑之比為20～100:1，柱高過高時，凝膠擠壓變形阻塞會引起較大的反壓，應當盡可能避免；分組分離（例如脫鹽）時用短柱，柱高控制在40～50cm以下，柱高與直徑的比約為5～10:1。
3．平衡：
上樣前用平衡液平衡層析柱至少3～5個柱體積直到記錄儀基線變得平穩為止（例如流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值）；
4．上樣：
分級分離時上樣量一般為5%的柱床體積，我們建議初次上樣控制在1～2%的床體積，視分離情況可以調整;脫鹽時上樣量可以達到20%的柱床體積。
樣品溶液如有雜質或沉淀應過濾或離心除去，樣品的粘度不能過高，否則影響分離效果。
5．洗脫方法:
可以用無鹽水，也可以采用上柱時的緩沖液洗脫；在上柱緩沖液中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以完全分離純化；
6．在位清洗(CIP)
凝膠使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床內沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氫氧化鈉反向清洗四個柱體積，再以至少三個柱體積平衡緩沖液再生。
7．保存
凝膠柱暫時不用，可將其回收，一般方法是將凝膠用水沖洗干凈濾干，可加入0.02%疊氮化鈉防腐或用20%乙醇浸泡，以控制微生物生長。

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貨號	名稱	規格
QN3987	羧甲基纖維素鈉(粘度300～800)	25g
Y13322	葡聚糖凝膠G-50	25g
Y13326	葡聚糖凝膠G-200	25g
Y13355	葡聚糖	10g
Y13384	分子篩3A型	1kg
Y13388	三硅酸鎂	250g
Y14842	HC-008型強酸性陽離子交換樹脂	500g

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名稱：DEAE-葡聚糖凝膠A-25
貨號：QN3990
規格：25g|100g|500g

名稱：鎳-瓊脂糖凝膠6FF
貨號：QN4044
規格：5ml|10ml|25ml|100ml
Ni-NTA瓊脂糖凝膠6FF是用于純化6×His標簽重組蛋白的一種純化介質，它是由6%交聯的Sepharose耦連了一種四齒螯合劑NTA而得.它可用于在非變性或變性條件下純化任何表達系統表達的6×His標簽重組蛋白。NTA，含有四個螯合區，較一般的三齒螯合劑能更好的結合Ni2+。6×His可與Ni2+螯合，從而使His標簽蛋白結合在Ni-NTA純化介質上，未結合的蛋白被洗滌下去，結合在介質上的蛋白經過一定濃度的咪唑或低pH緩沖液的溫和洗脫下來，從而得到高純度的目的蛋白。該純化介質與His標簽蛋白具有高的親和力，可達5-20mg/ml。可在非變性和變性條件下純化任何表達系統所得的His標簽蛋白。純化程序簡單，所得的蛋白純度可高達95％。Ni-NTA可再生4-6次，重復使用。本產品懸浮液為20％乙醇，已螯合Ni2+。操作方法：

別名：鎳-瓊脂糖凝膠6FF鎳瓊脂糖凝膠鎳柱
儲存條件：4℃保存，有效期至少一年

A.非變性條件下抽提His標簽蛋白

1)準備細胞，接種，誘導表達。收集細胞，置于-70℃或立即進行步驟2操作。

2)加入1/20細胞生長體積的NTA-0 Buffer和PMSF。PMSF使用的工作濃度為1mM現用現加。

3)將細胞懸浮起來，加入溶菌酶，混勻，冰上放置30分鐘，超聲或勻漿破碎細胞。該步驟冰上操作。

4)加入10% Triton X-100,使終濃度為0.05%，充分混勻，冰上放置15分鐘。

5)12000 rpm/min(20,000×g以上)，4℃離心15分鐘以上。取上清，置于冰上備用或-20℃保存。

6)將NTA樹脂裝入合適的層析柱，層析用10倍NTA體積的NTA-0 Buffer洗。

7)將樣品加至NTA層析柱中，流速在15ml/h左右，收集穿透部分，用SDS/PAGE分析蛋白的結合情況。

8)層析用5倍NTA體積的NTA-0 Buffer洗，流速控制在30 ml/h左右。

9)分別用5倍NTA體積的NTA-20、NTA-40、NTA-60、NTA-80、NTA-100、NTA-200、NTA-1000 Buffer洗脫，流速控制在15ml/h左右，收集洗脫液，每管收集一個NTA體積。

10)確定目標蛋白質在洗脫液中的分布情況。zuì為有效的方式是SDS-PAGE分析。也可以用Bradford蛋白質測定試劑盒，快速確定蛋白質的含量，然后用SDS/PAGE分析蛋白質的分布。

11)純化的目標蛋白質的保存條件需要根據蛋白質的性質和用途確定。NTA-0、20、40、60、80、100、200、1000Buffer分別為濃度20 mM Tris-HCl pH7.9,0.5M NaCl,10% Glycerol，添加0、20、40、60、80、100、200、1000 mM Imidazole。

B.變性條件下從包涵體中純化His標簽蛋白

1)準備細胞，接種，誘導表達。收集細胞，置于-70℃或立即進行步驟2操作。

2)加入1/20細胞生長體積的GuNTA-0 Buffer和PMSF。PMSF使用的工作濃度為1mM現用現加。

3)將細胞懸浮起來，冰上超聲破碎細胞，降低粘稠度。

4)室溫放置30分鐘，間或混勻或用磁力攪拌。

5)12000轉/分（20,000×g以上），4℃離心15分鐘以上。取上清，置于冰上備用或-20℃保存。

6)將NTA樹脂裝入合適的層析柱，層析用10倍NTA體積的GuNTA-0 Buffer洗。

7)將樣品加到NTA層析柱中，流速控制在15ml/h左右，收集穿透部分，用于SDS/PAGE分析蛋白質的結合情況。

8)層析用5倍NTA體積的GuNTA-0 Buffer洗，流速控制在30 ml/h左右。

9)分別用5倍NTA體積GuNTA-20、GuNTA-40，GuNTA-60、GuNTA-100、GuNTA-500洗脫，流速在15ml/h左右，收集洗脫液，每管收集一個NTA體積。

10)確定目標蛋白質在洗脫液中的分布情況。zuì為有效的方式是SDS/PAGE分析。也可以用Bradford蛋白質測定試劑盒，快速確定蛋白質的含量，然后用SDS/PAGE分析蛋白質的分布。

11)目標蛋白質需要進一步純化需要根據蛋白質的用途確定。

12)純化的目標蛋白質需要復性，復性常用的手段可以參考有關手冊確定的原則。

GuNTA-0、20、40、60、100、500Buffer分別為濃度20 mM Tris-HCl pH7.9,0.5M NaCl,10% Glycerol,6 M Guanidium HCl添加0、20、40、60、100、500 mM Imidazole。

C.NTA樹脂的再生

NTA樹脂在使用若干次數（3-5次）后，結合效率有所下降，可以用以下方法再生，提高樹脂的使用壽命和蛋白質的結合效率。

NTA樹脂再生前需要從層析柱下端流干所有溶液，估計出NTA的樹脂體積，按下列次序將再生試劑加到層析柱里，在等上一步再生溶液流干后，再加下一步再生溶解。

用戶需要自行準備25%、50%、75%、（v/v）乙醇和去離子水。從層析柱下端流干所有溶液，用2倍NTA樹脂體積的Stripping Solution I、2倍體積的去離子水、3倍體積的Stripping Solution II、1倍體積的25%乙醇、1倍體積的50%乙醇、1倍體積的75%乙醇、5倍體積的乙醇、1倍體積的75%乙醇、1倍體積的50%乙醇、1倍體積的25%乙醇、1倍體積的去離子水、5倍體積的Stripping Solution III、3倍體積的去離子水分別洗一遍。

如果立即使用，用5倍體積的Ni Charging Solution洗，再用10倍體積的平衡溶液（NTA-0Buffer或GuNTA-0 Buffer）洗；如果想長期儲存，加入1倍體積的20%乙醇，4℃保存，使用前用5倍體積的Ni Charging Solution洗，再用10倍體積的平衡溶液（NTA-0Buffer或GuNTA-0 Buffer）洗

再生溶液配方：Stripping Solution I:  6M GuHCl,0.2M acetic acid。Stripping Solution II: 2% SDS。        Stripping Solution III: 100 mM EDTA,pH 8.0。Ni Charging Solution: 100 mM NiSO4

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