Annexin V-PE/7-A由專業試劑供應商北京百奧萊博提供，用于科研試驗，我公司專注于細胞凋亡與增殖產品的研發、生產和供應，為您提供的Annexin V-PE/7-A質量可靠，批間差小，且價格公道，熱切盼望您選購我們的產品。...

特別提示：包括Annexin V-PE/7-AAD細胞凋亡檢測試劑盒在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：Annexin V-PE/7-AAD細胞凋亡檢測試劑盒
產品貨號：HR8283
產品規格：50T|100T

產品背景：
細胞凋亡是細胞的基本特征之一，它在機體的胚胎發育、組織修復、內環境的穩定和一些疾病發生過程等方面起著十分重要的作用。
在正常細胞中，磷脂酰絲氨酸(PS)只分布在細胞膜脂質雙層的內側，而在細胞凋亡早期，細胞膜中的磷脂酰絲氨酸(PS)由脂膜內側翻向外側。在體內，巨噬細胞可以識別翻轉到細胞膜表面的PS 從而將這些程序性死亡的細胞清除，因此凋亡過程中并不伴隨局部的炎癥反應，而在細胞壞死的過程中則常常伴隨著炎癥反應。
AnnexinⅤ是一種分子量為35-36kD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白，能與細胞凋亡過程中翻轉到膜外的PS 高親和力特異性結合。PS 外翻發生在細胞核破裂，DNA 片段化以及凋亡相關蛋白出現之前，這使得Annexin V 與PS的結合成為凋亡早期的一種重要檢測標志事件。
檢測原理：
在正常的活細胞中，磷脂酰絲氨酸(phosphotidylserine，PS)位于細胞膜的內側，但在早期凋亡的細胞中，PS 從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的表面，暴露在細胞外環境中。
Annexin-Ⅴ能與PS 高親和力結合。可通過細胞外側暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合。用標記了PE的AnnexinⅤ作為熒光探針，利用流式細胞儀或熒光顯微鏡可檢測細胞凋亡的發生。細胞壞死的過程中也會發生細胞膜損傷，壞死的細胞會結合Annexin V-PE。
Annexin V-PE 通常與細胞膜非滲透性核酸熒光染料聯合使用以檢測凋亡細胞。常用的染料是7-AAD。正常細胞和早期凋亡細胞的細胞膜是完整的，核酸染料7-AAD 不能透過完整的細胞膜，但在凋亡中晚期的細胞和壞死細胞，7-AAD 能夠透過細胞膜與細胞核結合呈現紅色。
7-AAD/Annexin V-PE試劑盒將AnnexinⅤ與7-AAD匹配使用，可以將凋亡早期的細胞和晚期的細胞以及死細胞區分開來。壞死細胞可以同時與Annexin V-PE和7-AAD 結合顯色，而7-AAD 則被排除在活細胞(PE陰性)和早期凋亡細胞(PE陽性)之外。在沒有巨噬細胞的情況下，凋亡的zuì后階段會像細胞壞死一樣發生整個細胞的解體，從而使凋亡晚期的細胞也同時被PE和7-AAD 結合染色呈現雙陽性。
在雙變量流式細胞儀的散點圖上，左下象限顯示活細胞，為(PE-/7AAD-)；右上象限是非活細胞，即壞死細胞，為(PE+ /7AAD + )；而右下象限為凋亡細胞，顯現(PE+/7AAD-)。
7-AAD/Annexin V-PE試劑盒7-AAD的發射波長是650nm,只占用FL3 通道進行檢測，FITC、PE 兩個通道受影響都小，可以做三色分析。
Annexin V-PE 細胞凋亡檢測試劑盒可以方便快捷的檢測凋亡細胞，使用流式細胞儀、熒光顯微鏡或其它熒光檢測設備進行檢測。

儲存條件：染色液2-8℃避光保存；結合液2-8℃保存；長期不用-20℃保存。
Annexin V-PE染色液避免反復凍融，凍融2次以上可能會失效。長期保存分裝后-20℃保存。
有效期：一年。

※ ※ ※ 使用前請仔細閱讀產品說明書 ※ ※ ※
使用限制：本試劑盒僅供科學研究使用，不可用于診斷或治療。
產品更新：我公司會更新或升級產品，以優化和增強其使用性能，產品說明書會進行相應的版本更新。使用產品時，請參照隨產品附帶的說明書，不要參照網上下載的說明書，可能是不同的版本。需要zuì新電子版說明書時可以在收到產品后發郵件索取。
使用安全：使用時需要合適的實驗室外套，一次性手套。避免皮膚或粘膜與試劑接觸。如果試劑不小心接觸皮膚或眼睛，應立即用水沖洗。

注意事項：
● 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。
● 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。
● 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。
● zuì好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并徹底清除殘留清潔劑。
● 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規定程序處理。

產品特點：
● 方便：可用流式細胞儀或熒光顯微鏡檢測；
●快速：1小時內即可完成實驗；
● 準確：能準確區分活細胞、凋亡細胞和壞死細胞，并計數各群細胞的比例。
檢測方法：
流式細胞儀或熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡。
樣本類型：
● 懸浮細胞 ● 貼壁細胞
試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：
儀器
● 流式細胞儀或熒光顯微鏡或激光共聚焦 ●離心機 ● 移液器 ●冰箱 ●冰盒
耗材
●離心管 ● 吸頭
試劑
● PBS(pH7.4，實驗室常用的10mM磷酸緩沖鹽溶液)或者HBSS

使用方法：

使用注意事項：
● 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體收集至管底，避免開蓋時液體損失導致試劑量不夠用。
● 細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。離心力在不損失細胞的前提下盡可能小，重懸細胞是動作要輕柔，避免多次反復的激烈吹打。不用渦旋振蕩器。
● Annexin V-PE和7-AAD 是光敏物質，在操作時請注意避光，盡量減少它們暴露在光下的時間。有必要時可以使用帶蓋子的冰盒或鋁箔紙避光。
● 由于細胞凋亡是一個快速和動態的過程，因此zuì好在染色后立即進行分析。
● 使用Annexin V-PE試劑盒檢測凋亡需要針對活細胞。不要固定細胞，固定操作會對結果產生干擾。
● 如果細胞樣品中含有血小板，如血液樣品，請使用含有EDTA的緩沖劑并200g離心洗去血小板。因為血小板含有PS，能與Annexin V 結合。
● 流式細胞儀檢測時，細胞數量應不低于1×105。
● 如果細胞收集過程中使用了胰酶，需注意用PBS 洗凈去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-PE，zuì終導致染色失敗。
● 貼壁細胞誘導凋亡時如有漂浮細胞，需收集漂浮細胞和貼壁細胞后合并染色。中晚期凋亡細胞失去貼壁能力而漂浮于培養基，此部分細胞對結果有顯著影響，不可隨意丟棄，需離心后收集與貼壁細胞一起檢測，才能的反映出細胞凋亡的整體情況；
●對于貼壁細胞，消化是一個關鍵步驟。處理貼壁細胞時要小心操作，盡量避免人為的損傷細胞，胰酶消化時間過短，細胞需要用力吹打才能脫落，容易造成細胞膜的損傷，7-AAD 攝入過多；消化時間過長，細胞膜同樣易造成損傷，甚至會影響細胞膜上磷脂酰絲氨酸與Annexin V-PE的結合。
消化時將胰酶鋪滿孔板底后，輕搖使胰酶與細胞充分接觸，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段時間，待細胞間空隙增大，瓶底呈花斑狀即可終止。在消化液中應不用EDTA，EDTA 影響Annexin V 與PS的結合。
● 成功的檢測凋亡受以下幾種因素的影響，如細胞類型、細胞膜上PS的密度、發生凋亡時PS 翻轉的比例、誘導細胞凋亡的方法、所用試劑、誘導凋亡的時間以及實驗過程中機械損傷的程度等，把這些影響因素進行優化對實驗成功與否至關重要。務必根據每次實驗樣本類型和操作流程對這些步驟進行優化。
●在進行流式細胞儀檢測之前，事行顯微鏡觀察有好處。
●有少數細胞株其細胞膜上PS的密度很低，難以染色，此時不適合用Annexin V 方法檢測凋亡。
樣品染色：
1．離心收集懸浮細胞。離心機300-500g 力，2-8℃，離心時間5分鐘，棄培養基。
【注】：
●對于貼壁細胞：小心收集細胞培養液到一離心管內備用。用不含EDTA的胰酶消化細胞，至細胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時，加入前面收集的細胞培養液，吹打下所有的貼壁細胞，并輕輕吹散細胞。再次收集到離心管內。
● 貼壁細胞用不含EDTA的胰酶消化后離心，收集細胞。胰酶消化時間不宜過長，以防損傷細胞膜，引起假陽性。
●檢測貼壁細胞時，胰酶消化前，去掉的上清也要保留，因為可能存在一些掉下來的凋亡細胞，在胰酶消化后，再將這些上清加回去，一起離心后收集檢測，結果更加準確。
●對于特定的細胞，如果細胞無法完全離心至離心管底，可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。
●離心轉速根據平時該細胞實驗時的轉速即可。
●離心后小心吸除上清，可以殘留約50μl 左右的液體，以避免吸走細胞。加入約1ml 4℃預冷的PBS，重懸細胞，再次離心沉淀細胞，小心吸除上清。
2．用冷PBS 洗滌細胞兩次。(300g-400g，2-8℃，離心時間5分鐘收集細胞)。
3．用400μl 1× Annexin V 結合液懸浮細胞，濃度大約為1-5×106cells/ml。
4．取100μl 細胞懸浮液中加入5μl Annexin V-PE染色液，輕輕混勻后于2-8℃ 避光條件下孵育5-10分鐘。
5．加入5-10μl 7-AAD染色液后輕輕混勻于2-8℃ 避光條件下孵育1-3分鐘。
6．加入400μl PBS，輕輕混勻。
7．立即用流式細胞儀或熒光顯微鏡檢測。
【注】：
●染色完成后要盡快上機檢測，因為細胞在Annexin V 結合緩沖液中存活時間不會太長。
流式細胞儀分析：
經處理過的細胞此時可以在流式細胞儀上分析。
按照常規的流式凋亡檢測的操作即可。
Annexin V-PE的熒光zuì大激發波長565nm，zuì大發射波長578nm，信號可以通過FL2(PE 接收器)通道檢測；7-AAD 紅色熒光zuì大發射波長在647nm，通過FL3 通道檢測。
上機檢測前，須用待測細胞制備質控樣本來設定流式細胞儀的熒光補償和設置十字門的范圍：
(I)未轉染GFP等標記的細胞
① 空白管：陰性對照組細胞，沒有染色的細胞。不加Annexin V/PE，7AAD。用于調節電壓。
② 單染管：有明顯凋亡的細胞，只加Annexin V/PE染色。用于調節補償。
③ 單染管：有明顯凋亡的細胞，只加7-AAD染色。用于調節補償。
④檢測管：待測的處理細胞，加Annexin V/PE，7AAD。用空白管和單陽管調節好電壓補償后，獲得所需要的流式數據。
(II)轉染GFP細胞
① 未轉染空白管：未轉染細胞，陰性對照組細胞，沒有染色的細胞。不加Annexin V/PE，7AAD。用于調節電壓。
② 轉染GFP 空白管：轉染GFP的對照組細胞，沒有染色的細胞。不加Annexin V/PE，7AAD。用于調節補償。
③ 未轉染單染管：未轉染且有明顯凋亡的細胞，只加Annexin V/PE染色。用于調節補償。
④ 未轉染單染管：未轉染且有明顯凋亡的細胞，只加7-AAD染色。用于調節補償
⑤檢測管：待測的處理細胞，加Annexin V/PE，7AAD。用空白管和單陽管調節好電壓補償后，獲得所需要的流式數據。
【注】：具體流式設置按常規方法即可。請參照流式細胞儀說明書或咨詢儀器技術支持。
熒光顯微鏡/激光共聚焦觀察：
1．滴加30-50μl用Annexin V-PE/7-AAD雙染的細胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細胞。
注：對于貼壁細胞，可以象懸浮細胞那樣染色后，滴一滴細胞懸液于載玻片上，用蓋玻片蓋上細胞，熒光顯微鏡下觀察。也可直接用蓋玻片培養細胞并誘導細胞凋亡。根據蓋玻片大小，置于24孔或12孔細胞培養板內培養，然后誘導細胞凋亡。細胞染色在細胞培養板內進行。先用PBS 沖洗兩次，加入400μl Annexin V 結合液于孔中。再加入5μl Annexin V-PE染色液與5μl 7-AAD染色液，混勻。避光室溫反應10分鐘。
2．在熒光顯微鏡下用雙色濾光片觀察。
Annexin V-PE染色陽性的細胞將在細胞膜表面呈現黃色。7-AAD染色陽性的細胞則會在整個胞質內呈現不同強度的紅色。
早期凋亡細胞不會被7-AAD染色或顯示背景熒光，而壞死或晚期凋亡細胞則會顯示出紅色的胞質，紅色的胞核和環繞細胞的黃色胞膜。在晚期凋亡細胞中還可以觀察到胞膜皺縮和起泡。
常見問題分析：
實驗過程中Annexin V染不上色或陽性率偏低。
● 確定實驗中的誘導劑是否能產生凋亡。可通過設定確切凋亡誘導效果的陽性藥物對照來排除這一情況。
● 貼壁細胞消化不當。Annexin V 跟PS的結合需要Ca2+離子，結合液中含有Ca2+，EDTA的消化會影響染色，建議使用無EDTA的胰酶，或者消化后用PBS 洗滌干凈。
● 細胞離心用冷PBS 洗滌后，應盡量吸干殘余液體，殘余過多的PBS中含有磷酸根，會形成磷酸鈣沉淀，影響Annexin V的染色。
● Annexin V 結合液瓶蓋要蓋緊密封，長時間暴露于空氣后，空氣中的CO2進入后形成CaCO3會產生沉淀，從而減少游離的Ca2+，導致實驗的結果不佳。
● 污染其他的緩沖液。如吸取PBS 后不更換Tip 頭會導致游離的Ca2+的減少，從而導致實驗的結果不佳。
●陽性細胞的丟失。如果是貼壁細胞，藥物誘導后漂浮的細胞要收集起來合并檢測，這部分細胞往往是凋亡陽性的細胞，丟棄會造成陽性結果偏低。
實驗過程中陽性率偏高。
● 細胞本身活力太差。實驗中發現未經誘導凋亡的對照細胞經染色后AnnexinV+/7-AAD+雙陽性的細胞比例過高，造成這種結果的原因可能是細胞本身活力太差。建議用臺盼藍染色計算細胞的活力，臺盼藍拒染的細胞應大于95%。若活力偏低低，建議重新復蘇細胞，通常剛復蘇的細胞至少要傳代3次以后才能進行實驗。
● 細胞操作不當。貼壁細胞消化過程中反復劇烈吹打導致細胞膜破壞，使得假陽性偏高。細胞洗滌、重懸等過程過于劇烈導致細胞膜損傷。Annexin V-PE會進入損傷的細胞膜，在細胞膜內部染色。
● 凋亡誘導時間過長。一般情況下誘導幾個小時就可以出現早期凋亡，因此通常不需要處理大于48小時以上，誘導時間過長會使營養物質耗盡，導致細胞狀態差，假陽性結果偏高。

根據您的關注的Annexin V-PE/7-AAD細胞凋亡檢測試劑盒，Annexin V-PE/7-AAD細胞凋亡檢測試劑盒，HR8283，百奧萊博，，，您可能還對以下產品有需求：

貨號	名稱	規格
YT157	CFDA SE細胞增殖與示蹤檢測試劑盒	2000次
YT898	碘化丙啶	5mg|20mg
SNM511	Caspase-8活性檢測試劑盒(分光光度法)	100T|50T|20T
SNM527	線粒體提取試劑盒	50T
SNM529	Annexin V-EGFP/PI雙染 細胞凋亡檢測試劑盒	50T|20T|10T
SNM531	TUNEL細胞凋亡原位檢測試劑盒(熒光及顯色法，細胞樣本)	50T|20T

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名稱：細胞凋亡陽性對照試劑盒
貨號：YT119
規格：200次
本試劑盒含有兩種不同的細胞凋亡誘導試劑，試劑A和試劑B。細胞凋亡誘導試劑A(Apopida)和試劑B(Apobid)分別可以誘導Hela、HEK293、CHO、COS等常見細胞的細胞凋亡。

由于細胞凋亡的誘導具有細胞特異性，細胞凋亡的機制也具有一定的細胞特異性，盡管細胞凋亡誘導試劑A和試劑B可以誘導常見的一些細胞的細胞凋亡，但是我們無法保證這兩種試劑可以誘導任何一種細胞發生凋亡。細胞凋亡誘導試劑A和試劑B相互補充，可以誘導更多種類的細胞產生凋亡。本試劑盒至少可用于檢測200個樣品。

試劑盒組份：

細胞凋亡誘導試劑A——————200μl
細胞凋亡誘導試劑B——————200μl

注意事項：對于不同的細胞，需要摸索細胞凋亡誘導試劑的不同濃度和誘導時間。

儲存條件：-20℃，有效期一年。

名稱：JC-1
貨號：YT147
規格：1mg
JC-1是一種廣泛用于檢測線粒體膜電位△Ψm 的理想熒光探針。可以檢測細胞、組織或純化的線粒體膜電位。在線粒體膜電位較高時，JC-1聚集在線粒體的基質中，形成聚合物，可以產生紅色熒光；在線粒體膜電位較低時，JC-1不能聚集在線粒體的基質中，此時JC-1為單體，可以產生綠色熒光。這樣就可以非常方便地通過熒光顏色的轉變來檢測線粒體膜電位的變化。常用紅綠熒光的相對比例來衡量線粒體去化的比例。

線粒體膜電位的下降是細胞凋亡早期的一個標志性事件。通過JC-1從紅色熒光到綠色熒光的轉變可以很容易地檢測到細胞膜電位的下降，同時也可以用JC-1從紅色熒光到綠色熒光的轉變作為細胞凋亡早期的一個檢測指標。

JC-1單體的zuì大激發波長為514nm，zuì大發射波長為529nm；JC-1聚合物的zuì大激發波長為585nm，zuì大發射波長為590nm。實際觀察時，使用常規的觀察紅色熒光和綠色熒光的設置即可。

JC-1稀釋和使用時有一些特殊的要求，因此對于初次使用JC-1的用戶或對于JC-1的使用不是非常熟悉的用戶，我們建議使用百奧萊博的線粒體膜電位檢測試劑盒(JC-1)(YT148)，該試劑盒配套提供了一些相關試劑，使用起來更加便捷。

CAS：3520-43-2
分子式：C25H27Cl4IN4
分子量：652.23
純度：＞95%
濃度：5mg/ml
溶劑：DMSO

注意事項：
1. JC-1如果一次使用量較小，需把每管再適當進行分裝，盡量避免反復凍融。
2. JC-1在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內，可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。

儲存條件：-20℃，有效期一年。

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