GL1300 DNA退火緩沖液(5×)
- 產品/服務：GL1300 DNA退火緩沖液(5×)
- 型 號：GL1300
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-06-02
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：982
產品簡介
DNA退火緩沖液(5×)是高品質的核酸擴增(PCR)產品，由北京百奧萊博供應，本產品用于生化實驗研究等領域，我公司的DNA退火緩沖液(5×)品質上佳，經過多年的開發生產，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...
產品詳細介紹
特別提示：包括DNA退火緩沖液(5×)在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
產品名稱：DNA退火緩沖液(5×)
產品貨號：GL1300
產品規格：1ml
用途：
用于DNA oligo退火的緩沖液
注意事項：
無菌溶液。主要由氯化鉀、Tris、氯化鎂等組成，經高壓滅菌處理。
儲存條件：-20℃，12個月
根據您的關注的DNA退火緩沖液(5×)，5×，DNA退火緩沖液，DNA退火緩沖液(5×)，GL1300，百奧萊博，，，您可能還對以下產品有需求：
| 貨號 | 名稱 | 規格 |
| BTN130815 | taq酶抗體 | 500U |
| BTN70902 | 5M甜菜堿溶液，PCR級 | 1.5mL |
| YT400 | 核酸酶清除劑(核酸酶噴霧清除劑) | 250ml |
| WE0150 | 一步法逆轉錄實時熒光定量PCR試劑盒(高含量ROX校正染料) | 100次 |
| RFT160 | 5M甜菜堿溶液(PCR級) | 5×1ml |
| JN0029 | BloTaq血液DNA聚合酶 | 400U |
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名稱：可逆型Taq DNA聚合酶抑制劑
貨號：BTN60901
規格：0.3mL
Taq DNA聚合酶是進行PCR的zuì常用工具酶，但是由于它在常溫下還是具有部分活性，所以經常會出現非特異的擴增產物，尤其是當PCR反應體系中有大量非特異DNA存在的時候。目前zuì常見的解決方法是使用抗Taq DNA聚合酶的抗體和使用經過化學修飾的熱啟動Taq DNA聚合酶(如AmpliTaq Gold)，但前者的缺點是加熱后抗體會不可逆失活，后者的缺點是需要預熱處理使酶激活。
產品特點：
1.可逆抑制Taq DNA聚合酶的活性，即常溫抑制Taq酶活性，在45℃以上抑制功能喪失，當溫度降低到45℃以下后，抑制活性又得以恢復。
2. 耐熱，產品本身為非蛋白質試劑，遠比Anti-Taq抗體穩定，便于保存和運輸。
3. 使用簡單，在加Taq酶前將本產品按PCR反應體積的1/10直接加入即可。
4.適用范圍廣，除Taq DNA聚合酶外，還可用于抑制其他DNA聚合酶的活性，如：Tth pol、Stoffel片段、Tfl pol、Tbr pol等。而一種酶的抗體一般對另一種酶的活性沒有抑制作用。
5.與后續的RT-PCR兼容。
儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。
使用方法：
在加入Taq或Tth DNA聚合酶之前，按PCR反應終體積1/10的比例將本產品加入到反應體系中混勻，然后再加入DNA聚合酶，啟動PCR反應。
名稱：即用型易錯PCR試劑盒
貨號：BTN101005
規格：100次
本產品就是專門為廣大的研究工作者進行易錯PCR而開發。易錯PCR是利用Taq DNA多聚酶不具有3′→5′校對功能的特性，在一定條件下(如不同的dNTP濃度、Mg濃度和MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。如果有適當的選擇方法，則可從構建的突變庫選出所需突變體。
產品特點：
1. 即開即用，十分簡單方便，尤其在生物制藥和酶學研究領域顯示出了它的優越性。
2. 配方經過精心優化，突變率穩定，突變沒有趨向性。易錯PCR的突變率為0.66%(±0.13%)，詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內基因突變更快捷簡單，但如果在PCR引物中設計位點，則可使產物克隆到表達載體，也可以用于體內蛋白活性的篩選。
4.可用于連續易錯PCR，只需把上一次易錯PCR的產物用作下一次易錯PCR的模板即可，使每一次獲得的小突變累積而產生重要的有益突變。
5. 只適用于擴增1kb以下的產物，對于1kb以上的產物，建議分段擴增。
試劑盒組成：
| 成分 | 規格 |
| Taq DNA聚合酶(5U/μL) | 100μl |
| 易錯PCR Mix，10× | 300μl |
| 易錯PCR專用dNTP，10× | 300μl |
| MnCl2，5mM | 300μl |
| 說明書 | 1份 |
儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期為一年。
使用方法：
1.以30μL的標準PCR反應體系為例，如果反應體系不是30μL，各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的PCR管中，加入下列成分：
| 易錯PCR Mix,10× | 3μl |
| 易錯PCR 專用dNTP，10× | 3μl |
| MnCl2，5mM | 3μl |
| 自備DNA模板(10ng/μL) | 1μl |
| PCR引物(自備，10μm each) | 10pmol each |
| Taq DNA聚合酶(5U/μL) | 1-5U |
| 補水到 | 30μl |
2. 按已經優化的PCR條件進行一定循環數的PCR(循環數與突變率的關系見下表)，然后取5μL電泳檢查。如果沒有優化的PCR條件，一般可以先嘗試下面的PCR條件：
| PCR前變性 | 94℃ 3分鐘 | |
| 易錯PCR | 94℃ 1分鐘 | 循環30次(見注) |
| 45℃ 1分鐘 | ||
| 72℃ 1分鐘 |
注：易錯PCR一般不需要熱啟動，也不需要在PCR結束后做延伸處理。
循環次數與突變幾率的關系
易錯PCR循環次數決定每個核苷酸位置的突變幾率，進而決定每個PCR產物可能得突變位點數，所以所需循環數由客戶根據需要改動。
| PCR循環數 | 每個堿基突變幾率 | PCR終產物中的突變位點數 | ||||
| 100bp | 200bp | 400bp | 800bp | 1600bp | ||
| 5 | 0.0033 | 0.00 | 0.66 | 1.3 | 2.6 | 5.3 |
| 10 | 0.0066 | 0.66 | 1.3 | 2.6 | 5.3 | 11 |
| 20 | 0.013 | 1.3 | 2.6 | 5.3 | 11 | 21 |
| 30 | 0.020 | 2.0 | 4.0 | 7.9 | 16 | 32 |
| 50 | 0.033 | 3.3 | 6.6 | 13 | 26 | 53 |
3.電泳檢測是否得到預計長度的PCR產物。
疑難解答：
Q：易錯PCR與定點突變PCR有什么區別？
A：定點突變是指通過聚合酶鏈式反應(PCR)等方法向目的DNA片段(可以是基因組，也可以是質粒)中引入所需變化(通常是表征有利方向的變化)，包括堿基的添加、刪除、點突變等。它需要預先知道靶基因的序列。易錯PCR是一種隨機突變，它不需要預先知道靶基因的序列(引物結合部分除外)，但需要后續的篩選方法篩選自己所需要的突變。
Q：易錯PCR的錯誤率是多少？
A：易錯PCR的突變率為0.66%(±0.13%)，對500bp的PCR產物，相當于有4%的PCR片段為野生型，12%的含一個突變，20%的含兩個突變，22%的含三個突變，18%的含四個突變，12%的含五個突變，12%的含六個或更多突變。
Q：如果需要每個核苷酸有高于0.66%的突變率，如何辦？
A：可以使用連續多次易錯PCR來提高突變率。但zuì好先用膠純化回收PCR片段,再用于下一輪PCR。此外不能用少于千分之一的次PCR產物作為第二輪易錯PCR的模板，否則多樣性將受到影響。第三輪易錯PCRzuì好使用所有第二輪的PCR產物作為模板，但需要在10mL體系中完成(可以分成很多100μL體系進行)。
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