QN4073 丁基-瓊脂糖凝膠4B
- 產品/服務：QN4073 丁基-瓊脂糖凝膠4B
- 型 號：QN4073
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-06-02
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：1024
產品簡介
丁基-瓊脂糖凝膠4B是高品質的分離試劑類產品，由北京百奧萊博供應，本產品僅用于生物化學研究方面，我公司專注于分離試劑類產品的研發、生產和供應，為您提供的丁基-瓊脂糖凝膠4B質量可靠，批間差小，且價格公道，熱切盼望您選購我們的產品。...
產品詳細介紹
特別提示：包括丁基-瓊脂糖凝膠4B在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
產品名稱：丁基-瓊脂糖凝膠4B
英文名稱：Butyl-Sepharose 4B
產品貨號：QN4073
產品規格：25ml
丁基-瓊脂糖凝膠4B是將丁基鍵合在瓊脂糖凝膠4B上形成的一種可利用疏水相互作用來實現目標產品純化分離的疏水類介質。用于生物大分子和乙肝疫苗的純化分離。本品為白色球狀凝膠,無嗅、無味、無肉眼可見雜質。
理化指標：
| 項目 | 指標 |
| 配基 | 丁基 |
| 基質 | 4%交聯瓊脂糖凝膠 |
| 形狀 | 球形 |
| 粒徑 | 45～165μm |
| 配基密度 | 6～14μmol/ml介質 |
| zuì高流速(25℃) | 100KPa下50cm/h* |
| 耐壓 | 0.1MPa |
| 工作溫度 | 4～40℃ |
| pH適用范圍 |
4～8（短時間，在位清洗）； 4～8（長時間） |
| 化學穩定性 |
以下溶液中穩定： pH4.0～8.0中穩定； 0.1% triton水溶液和1% MOPS溶液中穩定； 5%甲醛中基本穩定 |
*柱子：內徑16mm、柱長10cm，柱床高5cm，25℃，流動相為0.1mol/L NaCl。
包裝：產品以無菌試劑瓶密封包裝，外貼標簽，注明“品名、體積、顆粒大小、應用、生產單位”等內容。所選用的包裝應有利于保證產品質量、方便運輸和貯存。
運輸：運輸中應避免日曬、雨淋、重壓，嚴禁與有毒、有害物品混運。
保存條件：產品應密封貯存在4～30℃（保存溶液為20%乙醇+0.1M醋酸鈉），通風、干燥、清潔的地方，不能冷凍，保質期5年，用過的柱子貯存在4℃（20%乙醇）。
使用過程：
1．裝柱
① 讓所有的材料和試劑達到室溫。配制初始緩沖液（平衡液）和洗脫緩沖液。
② 根據柱子大小取所需量的凝膠，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始緩沖液（按凝膠：緩沖液=3：1的比例）配成勻漿。
③ 將柱內及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位（液面略高于濾膜），務必使底端無氣泡。
④ 用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內，注意勿使產生氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內自由沉降，連結好柱子頂端柱頭。
⑤ 打開蠕動泵，讓緩沖液用使用時流速的1.33倍的流速流過，使柱床穩定。用2~3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。
2．平衡
讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子，到流出液電導和pH不變。平衡緩沖液一般是高鹽濃度的緩沖液，如0.02～0.05mol/L的PBS加1～2.5mol/L(NH4)2SO4等。
3．上樣
① 樣品用平衡液配制，渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。
② 一般情況是讓目標產品結合在柱子上，用平衡液洗去雜質，再選擇一種洗脫液洗下目標產品。
③ 介質對樣品組分吸附的程度取決于樣品的疏水性質、流動相的離子強度和溫度。鹽濃度大、溫度高或樣品組分疏水性強，介質對組分吸附牢。
4．洗脫
疏水介質可用減小鹽濃度進行洗脫。加表面活性劑或有機溶劑可加強洗脫。zuì常用的洗脫液是低鹽濃度緩沖液，如0.02~0.05mol/L的PBS。
5．再生
一般用低鹽濃度的緩沖液洗，洗10倍以上柱體積，接著用結合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。若有失活蛋白質或脂類物質在再生時洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。
6．在位清洗
① 對于以離子鍵結合上去的蛋白，可以用2M Nacl去除。
② 對沉淀蛋白、對以疏水性結合的蛋白或脂類，可用1M NaOH去除。
③ 對強疏水性結合的蛋白、脂類等，用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，但要注意有機溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產生氣泡。
清洗完畢后，用至少3倍緩沖液平衡柱子。
7．注意
在裝柱、使用和保存柱子的時候，要避免柱子流干，氣泡進入。
8．去熱源
用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5～6小時或用0.1M的氫氧化鈉24小時。或用以下方法步驟去除：
① 2倍柱體積的70%乙醇；
② 2倍柱體積50mM Tris-Hcl pH7.5；
③ 1倍柱體積4M尿素；
④ 3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1M Nacl；
上緩沖液都在無熱源的雙蒸水中配制。
9．消毒用0.5～1M NaOH室溫下洗8～10倍柱體積，初始緩沖液平衡柱子。
特別注意：上樣之前，樣品必須去除色素，否則色素會被吸附到填料上，影響填料的正常使用。
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DEAE-SephadexA-50(二乙基氨基乙基葡聚糖A-50)為弱堿性陰離子交換劑。用NaOH將CL-型轉變為OH-型后，可吸附酸性蛋白。血清中的γ球蛋白屬于中性蛋白(等電點為PH6.85-7.5)，其余均屬酸性蛋白。在PH7.2-7.4的環境中，酸性蛋白均被DEAE-Sephadex A-50吸附，只有γ球蛋白不被吸附。因此，通過柱層析γ球蛋白便可在洗脫中先流出,而其他蛋白則被吸附在柱上,從而便可分離獲得純化的IgG。
基質：Sephadex
顆粒大小：40～120μm
zuì大流速：45cm/h
工作pH：pH2.0～9.0
儲存條件：室溫
實驗步驟：
1．預處理
稱DEAE-Sephadex A-50(下稱A-50)5克，懸于500ml蒸餾水，1小時后傾去上層細粒。按每克A-50加0.5M NaOH 15ml的比例，將A-50浸泡于0.5M NaOH中，攪勻，靜置30分鐘，裝入布氏漏斗(墊有2層濾紙)中抽濾，并反復用蒸餾水抽洗至PH呈中性；再以0.5M HCl同上操作過程處理，zuì后以0.5M NaOH再處理一次。處理完后，將A-50浸泡于0.1M，PH 7.4 PB中過夜。
2．裝柱
① 將層析柱垂直固定于滴定鐵架上，柱底墊一園尼龍紗，出水口接一乳膠或塑料管并關閉開關。
② 將0.1M，PH7.4 PB沿玻璃棒倒入柱中至1/4高度，再倒入經預處理并以同上緩沖液調成稀糊狀的A-50。待A-50凝膠沉降2～3cm厚時，啟開出水口螺旋夾，控制流速1ml/分鐘，同時連續倒入糊狀A-50凝膠至所需高度。
③ 關閉出水口，待A-50凝膠完全沉降后，柱面放一園形濾紙片，以橡皮塞塞緊柱上口，通過插入橡皮塞之針頭及所連接的乳膠或塑料管與洗脫液瓶相連接。
3．平衡
啟開出水口螺旋夾，控制流速12-14滴/分鐘，使約2倍床體積的洗脫液流出。并以PH計與電導儀分別測定洗脫液及流出液之PH值與離子強度是否相同。達到一致時關閉出水口，停止平衡。
4．加樣及洗脫
啟開上口橡皮塞及下口螺旋夾，使柱中液體緩慢滴出，當柱面液體與柱面相切時，立即關閉出水口，以毛細滴管沿柱壁加入樣品(體積應<床體積的2％，蛋白濃度以＜100mg為宜)。松開出水口螺旋夾使柱面樣品緩慢進入柱內，至與柱面相切時，立即關閉下口，以少量洗脫液洗柱壁2-3次；再放開出水口，使洗液進入床柱，隨后立即于柱面上加入數ml洗脫液，緊塞柱上口，使整個洗脫過程成一密閉系統。并控制流速12～14滴／分鐘。
5．收集
開始洗脫的同時就以試管進行收集。每管收集3～5ml。共收集10～15管。
6．測蛋白
以751-G型紫外分光光度計分別測定每管OD280nm，與OD260nm，按前述公式計算各管蛋白含量。并以OD280nm為縱座標，以試管編號為橫座標，繪制洗脫曲線。
7．合并、濃縮
將洗脫峰的上坡段與下坡段各管收集液分別進行合并，以PEG(MW6000)洗縮至所需體積，加入0.02％NaN3防腐劑，于4℃保存備用。
8．A-50凝膠的再生
在柱上先以2M NaCl洗柱上的雜蛋白至流出液的OD280nm＜0.02，再以蒸餾水洗去柱中鹽。然后按預處理過程將A-50再處理一遍即達再生。近期用時泡于洗脫緩沖液中４℃保存；近期不用時，以無水酒精洗2次，再置50℃溫箱烘干，裝瓶內保存。
注意事項：
1．柱的選擇：從理論上說，只要柱足夠長，就得獲得理想的分辨率，但由于層析柱流速同壓力梯度有關，柱長增加使流速減慢，峰變寬，分辨率降低。柱的直徑增加，使液體流動的不均勻性增加，分辨率明顯下降。
2．純化過程必須嚴格控制脫緩沖液的PH及離子強度。樣品與A-50凝膠必須用洗脫緩沖液徹底平衡后，才能進行柱層析。
3．所裝的柱床必須表面平整，無溝流及氣泡，否則應重裝。
4．洗脫過程中應嚴格控制流速，且勿過快。
5．上樣的體積要小，濃度不宜過高。
6．加樣及整個洗脫過程中，嚴防柱面變干。
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