KFS250 活細胞/凋亡細胞/壞死細胞鑒別試

產品簡介
北京百奧萊博供應的活細胞/凋亡細胞/壞死細胞鑒別試劑盒(AO/EB法.熒光顯微鏡)僅用于生物化學研究方面,我公司專注于細胞凋亡與增殖產品的研發、生產和供應,為您提供的活細胞/凋亡細胞/壞死細胞鑒別試劑盒(AO/EB法.熒光顯微鏡)質量可靠,批間差小,且價格公道,熱切盼望您選購我們的產品。...
產品詳細介紹
特別提示:包括活細胞/凋亡細胞/壞死細胞鑒別試劑盒(AO/EB法.熒光顯微鏡)在內,本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途!
產品名稱:活細胞/凋亡細胞/壞死細胞鑒別試劑盒(AO/EB法.熒光顯微鏡)
英文名稱:Normal/Apoptotic/Necrotic Cell Detection Kit
產品貨號:KFS250
產品規格:50T|100T
細胞壞死和凋亡是兩種截然不同的細胞學現象,二者發生的過程在形態學上有很大的區別。在細胞壞死時,細胞膜發生滲漏,細胞內容物包括細胞器以及染色質釋放到胞外。而在細胞凋亡過程,起始階段,染色質固縮、分離并沿核膜分布,細胞質亦發生固縮,但細胞膜依然完整未失去選擇透性;在凋亡后期,核染色質斷裂為大小不等的片斷,與某些細胞器如線粒體一起聚集,為反折的細胞膜所包圍,以后逐漸分離,形成凋亡小體。
本產品提供的染料可以分別對正常細胞、凋亡細胞和壞死細胞的細胞核進行染色。其染色原理為:DyeReagent 1 只進入活細胞,正常的細胞核及處于凋亡早期的細胞核呈現綠色;Dye Reagent 2 只能進入死細胞,將死細胞以及凋亡晚期的細胞核染成橙色。因此通過在熒光顯微鏡下觀察細胞顯色和形態的不同,可以同時將正常細胞、壞死細胞、凋亡早期細胞和凋亡晚期細胞區分開來。
注意事項
1. Dye Reagent 1、2 及Mixed Dyes Reagent 有毒,操作時請戴手套;
2. zuì好根據需要檢測的實際樣品數在使用前將兩種染料混合,剩余混合染液注意避光保存留待下次使用;
3. 利用血球計數板進行該項操作時,不要用血計板配套的那種質地較硬的蓋玻片,而用普通的蓋玻片反而更利于結果的觀察。
操作方法
1. 用適當的方法誘導細胞凋亡;
2. 用PBS 洗滌細胞二次,并配成濃度為5×105~6×106cells/ml 細胞懸液;
3. 將Dye Reagent 1 和Dye Reagent 2 等體積混合形成Mixed Dyes Reagent(見注意事項2);
4. 吸取25μL 的細胞懸液同1μL 的Mixed Dyes Reagent 輕輕混勻;
5. 吸取上述10μL 的混合液置于一潔凈的載玻片,并用蓋玻片蓋上細胞(見注意事項3);
6. 熒光顯微鏡510nm 激發波長觀察,分別對下列四類細胞進行計數,注意細胞總量須超過200 個。
儲存:2-8℃,避光,有效期12個月。
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名稱:XTT細胞增殖與細胞毒性檢測試劑盒
貨號:BTN140635
規格:500次
XTT能被活細胞里的線粒體脫氫酶降解而產生橙黃色水溶性的甲臜,通過測定甲臜的光譜吸收,進而可以測定細胞的增殖情況。XTT與MTT同屬四唑氮衍生物,它們檢測細胞活性的反應原理相似,原理圖如下:

產品特點:
1.盒靈敏度,可檢測低細胞密度樣品,檢測結果的重復性優于MTT。
2.操作簡便、快捷。可直接加入到檢測平板。在96-孔板中檢測時,無需洗滌或收獲細胞,免去溶解步驟。
3.無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。
4.與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發性的有機溶劑來溶解甲基產物。
試劑盒組成:
| 成分 | 規格 |
| 溶液A | 5ml |
| 溶液B | 50ml |
| 說明書 | 1份 |
儲存條件:低溫運輸、-20℃保存(但溶液B也可以常溫運輸和保存),有效期一年。
使用方法:
下面操作是檢測細胞毒性的試驗,其他應用跟此類似或更簡單(如生長曲線試驗),操作步驟可以以此為基礎稍作修改即可,故不再贅述。
㈠、接種細胞
1.按常規胰酶消化法消化匯合的單層細胞,收集到含血清的培養基中。
2.200g離心5分鐘收集細胞沉淀。
3.用培養基重懸細胞沉淀,制備成單細胞懸浮液并計數。
4.將細胞稀釋到2.5×103個/mL~5×10個/mL之間(需要根據細胞的生長速度決定),如果不知道生長數度,一般可以稀釋到1×10個/mL。
5.將足夠量的細胞懸液轉移到培養皿中(便于用排槍取樣)。一個96孔板的MTT檢測需要約20mL的細胞懸液。
6.用排槍在96孔板除的第2-11列各孔正中央加入200μL細胞懸液(對正常細胞)。如果是腫瘤細胞,則加入100μL腫瘤細胞懸液和100μL培養基(總體積為200μL)。
注意:一定要把細胞加在孔的正中,否則細胞會聚集在孔的角落處,影響試驗。
7.用排槍在96孔板除的第1和第12各孔中加入跟細胞懸液等體積的培養基。第1 列各孔將作為+培養基-細胞+MTT對照(用于測OD時調零),第12列加培養基的作用是減少邊緣效應對第11列反應的影響。
8.按常規細胞培養方法在37℃和5% CO2條件下孵育1-3天,使細胞進入指數生長期。
㈡、藥物處理
9.用培養基將藥物稀釋到8個待測濃度(如果不知道待測濃度,則需要預試驗確定),一般一種藥物需要做3塊平行板。
10.去除第2到第11列(共10列)各孔中的培養基(不要觸動細胞),保留第1 列和第12列各孔中的培養基。
11.在第2和第11列(共2列)的各孔中加入200μL新鮮培養基,這些孔將作為+培養基+細胞-藥物的對照。
12.在第3到第10列(共8列)各孔中加入8個濃度梯度的待測藥物,每列加入一個濃度的藥物。
13.按常規方法把96孔板繼續放在37℃和5% CO2條件下孵育一定的時間,此段時間即為藥物處理細胞的時間,由用戶自己決定。
14.處理結束后去除第2到第11列(共10列,均含細胞)所有孔中的培養基,并再加入100μL新鮮培養基。
15.每天換培養使細胞數量擴增2-3倍(所需時間隨細胞不同而不同)。
㈢、存活細胞計數
16.在生長末期,去除第1到第11列各孔中的培養基后,再加入100μL新鮮培養基和10μL溶液A(含MTT成分),用錫箔包裹住96孔板后放在37℃和5% CO2條件下繼續培養4-8小時。
注意:溶液A在低溫情況下會凝固,使用前請室溫放置或20-25℃水浴至全部溶解,搖勻后使用。MTT有致癌性,一定要帶手套操作。
17.小心吸棄孔內培養基(含溶液A)。由于培養基可能會影響光吸收,zuì好盡可能去除。
18.每孔加入100μL溶液B,置搖床上低速振蕩10分鐘,使MTT形成的formazan結晶物充分溶解。
19.由于產物不穩定,故需要立即在酶聯免疫檢測儀上選擇490nm測定吸光度。
注意:用第1 列各孔(+培養基-細胞+MTT對照)調零。
20.計數同樣處理的各次重復的平均值。
21.以藥物濃度為橫軸,以吸光度為縱軸繪制曲線。由于各處理吸光度值差別很大,一般需將其轉化成生長抑制率(以不加藥物的第2和第11列各孔數據的平均數作為),這樣便于計算出IC50,用于各種藥物處理效果的比較。
注意:如果測生長曲線,則以時間為橫軸。正常生長曲線一般呈現S型,具有促進作用的則斜率加大。
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